链球菌溶血素O真核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化.docx
链球菌溶血素O真核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化
目录
链球菌溶血素O真核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化（1）．．．．．4
一、内容简述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4
国内外研究现状及发展趋势．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5
研究目的及内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6
二、链球菌溶血素O基因的特点及克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7
链球菌溶血素O基因的基本特点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9
基因的克隆与扩增技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10
引物设计与合成．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11
三、真核表达载体的选择及构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12
真核表达载体的简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13
表达载体的选择与改造．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14
重组表达载体的构建流程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15
重组载体的鉴定与验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16
四、重组蛋白的表达及检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17
转染与表达细胞的准备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18
重组蛋白的诱导表达．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19
蛋白表达水平的检测与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20
五、重组蛋白的纯化及活性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22
纯化方法的选择及原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23
纯化过程中的操作要点．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24
重组蛋白的活性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25
六、实验结果分析与讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26
实验结果的分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27
实验结果的讨论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29
实验中的注意事项与问题解决方案．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30
七、结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31
研究结论．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
研究成果的意义与价值．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32
未来研究展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34
链球菌溶血素O真核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化（2）．．．．34
内容概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34
1.1目的与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35
1.2材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36
1.3链球菌溶血素O的背景信息．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37
1.4重组蛋白表达纯化的理论基础．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38
真核表达载体的构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39
2.1选择合适的载体．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41
2.2导入链球菌溶血素O基因序列．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42
2.3优化启动子和终止子．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43
2.4重组质粒的构建与鉴定．