《牛奶中磺胺类药物的测定 高效液相色谱-串联质谱法》.docx
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牛奶中22种磺胺类残留量的测定液相色谱-串联质谱法
1范围
本文件规定了牛奶中磺胺类抗生素（磺胺醋酰、磺胺苯酰、磺胺氯哒嗪、磺胺二甲基嘧啶、磺胺地索辛、磺胺多辛、磺胺嘧啶、磺胺异恶唑、磺胺脒、磺胺索嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲唑、磺胺甲氧嗪、磺胺甲嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲恶唑、磺胺苯吡唑、磺胺吡啶、磺胺喹恶啉、磺胺噻唑、甲氧苄啶）的液相色谱-串联质谱检测方法。
本文件适用牛奶中22种磺胺类的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4原理
试样经1%的甲酸乙腈溶液提取，经分散固相萃取净化，反相色谱柱分离，供液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。
5试剂和材料
本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
5.1试剂
5.1.1乙腈：色谱纯。5.1.2甲酸：优级纯。5.1.3氯化钠：分析纯
5.1.4十八烷基（C18）粉末：粒径50μm。
5.1.5N-丙基乙二胺(N-primarysecondaryamine,PSA)粉末：粒径50μm。
5.1.61%甲酸乙腈：取10.0mL甲酸（5.1.2），用乙腈（5.1.1）定容到1000mL，摇匀。
5.1.70.1%甲酸乙腈：取1mL甲酸（5.1.2），用乙腈（5.1.1）溶解定容到1000mL，摇匀。5.1.815%甲酸乙腈：取150mL甲酸（5.1.2），用水溶解定容到1000mL，摇匀。
5.1.90.1%甲酸水：取1mL甲酸（5.1.2），用水溶解定容到1000mL，摇匀。
5.2标准品
22种磺胺标准品名称、化学分子式和CAS号见附录表A。
5.3标准溶液配制
T/NAIAXXX—2025
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5.3.1标准储备液（1.0mg/mL）：分别准确称取22种磺胺标准物质适量，用乙腈(5.1.1)溶解并定容至10.0mL容量瓶中，避光冷冻贮存，保存3个月。
5.3.2混合标准储备液（10.0μg/mL）：分别移取22种标准储备液100μL，混合后用乙腈(5.1.1)稀释得到10.0μg/mL的混合标准储备溶液，避光冷冻贮存，保存1个月。
5.3.3混合标准工作溶液：分别准确吸取不同体积混合标准储备液，用空白基质定容至1.0mL，配制成浓度为1.0~200.0ng/mL的标准工作溶液，临用现配。
6仪器和设备
6.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源。6.2天平：感量0.00001g和0.01g。
6.3涡旋混合器。
6.4高速离心机：最大转速8000r/min。6.5超声波清洗器。
6.6氮吹仪。
6.7有机微孔滤膜，孔径0.22μm，或相当者。
7分析步骤
7.1试样制备
取适量样品混合均匀，冷藏保存。
7.2试液的提取
称取5.0g试样（精确到0.01g），置于50mL具塞离心管中，加入10g氯化钠（5.1.3）和20mL甲酸乙腈（5.1.6），高速涡旋5min，8000r/min离心5min，取上清液；残渣再加20mL的甲酸乙腈（5.1.6）重复提取一次，合并上清液，用15%的甲酸乙腈（5.1.8）定容至50mL，待净化。移取5.0mL上清液至内含80mgC18（5.1.4）和50mgPSA（5.1.5）离心管中，涡旋5min，8000r/min离心5min，吸取上清液氮吹至近干，1.0mL初始流动相复溶，过0.22μm滤膜（6.7），供液相色谱-串联质谱仪测定。
7.3仪器参考条件
7.3.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：C18，2.1mm×150mm，粒径3.5μm或性能相当。
b）柱温：30℃。
c）流动相：A：0.1%的甲酸溶液（5.1.9），B：0.1%甲酸乙腈溶液（5.1.7）；梯度洗脱见表1。
d）流速：0.3mL/min。e）进样量：5μL。
T/NAIAXXX—2025
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表1流动相及梯度洗脱条件
时间/min
流速/（mL/min）
流动相A/%
流动相B/%
0.00
0.3
90
10
3.00
0.3
90
10
3.01
0.3
50
50
8.00
0.3
30
70
12.00
0.3
10
90
12.01
0.3
90
10
15.00
0.3