细胞培养基本方法从体内到体外.ppt

（六）清洗和消毒2、培养用具的消毒和灭菌（2）化学方法：6）碘伏(iodophor)与碘酊碘伏是一种广谱杀菌剂，能杀死细菌、芽孢、真菌、病毒等，且杀菌的速度很快。近年来已在临床广泛使用，医用碘伏是聚烯毗咯烷酮-碘（PVP-I），它可用来进行操作者的手消毒和手术野的皮肤消毒。第96页,共97页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第97页,共97页，2024年2月25日，星期天３、其它常用液（3）pH调整液1)NaHCO3溶液：为了使培养液营养成分稳定和延长贮存时间，一般不预先在培养液中或平衡盐溶液中直接加入NaHCO3，而是单独配制，消毒除菌后，在使用前加入。2)HEPES溶液：HEPES的化学名全称为：羟乙基哌嗪乙硫磺酸。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围，尤其是在开瓶通气培养或观察时能维持正常pH。（四）培养用液第64页,共97页，2024年2月25日，星期天３、其它常用液（4）抗生素液为了预防因无菌操作不严而发生污染，培养液内一般需加入适量的抗生素。用于体外培养的抗生素以青霉素应用最普遍。通常在培养液中的终浓度为20～100ＩU/ml。青霉素可以和链霉素（使用浓度为50μg/ml)联合应用抑制耐青霉素的菌株。（5）谷氨酰胺溶液（略）（四）培养用液第65页,共97页，2024年2月25日，星期天实验课时间：从第14周开始实验课地点：104馆三楼东边注意事项：1.网上没有名字的同学请不要填报实验课名单。2.现在不能确定自己时间的同学不要填报，可以下次上课时再报。3.一旦填报就不能再更改时间。第66页,共97页，2024年2月25日，星期天１、无污染的气、液相环境２、温度３、生长基质O2CO2液相环境多聚赖氨酸纤维连接蛋白胶原层粘连蛋白亲玻粘连蛋白韧粘素（五）细胞在体外生长的其它条件第67页,共97页，2024年2月25日，星期天１、无污染的气、液相环境体外培养技术特别强调无菌操作。组织取材、细胞分离、种植、传代、孵育以及利用培养的细胞进行各种实验时，都必须在无污染环境下进行；培养所用的各种器具、液体以及其它用品都需严格消毒灭菌，以保证培养物不被污染。在无污染的前提下，必须为培养物提供适宜其生存和生长的气、液相环境。（五）细胞在体外生长的其它条件第68页,共97页，2024年2月25日，星期天１、无污染的气、液相环境气体环境是细胞生存的必要条件之一。供应气体的方式是向培养箱内通入含有一定比例CO2的空气。其中，与细胞生命活动密切相关的气体主要有O2和CO2。O2和CO2以气体扩散方式进入培养液和培养物内。O2(oxygen)参与细胞的能量代谢，为细胞生命活动提供能量。CO2（carbondioxide）主要与维持培养液的酸碱度有直接关系。（五）细胞在体外生长的其它条件第69页,共97页，2024年2月25日，星期天１、无污染的气、液相环境体外细胞生长的液相环境是各种平衡盐溶液或培养液。水和无机盐是其中最主要的成分，并由它们构成溶液的渗透压，也就是细胞膜外的渗透压。在配制各种培养用液时，必须严格按照配方和配制方法的要求进行，以保证溶液为等渗。（五）细胞在体外生长的其它条件第70页,共97页，2024年2月25日，星期天１、无污染的气、液相环境２、温度３、生长基质O2CO2液相环境多聚赖氨酸纤维连接蛋白胶原层粘连蛋白亲玻粘连蛋白韧粘素（五）细胞在体外生长的其它条件第71页,共97页，2024年2月25日，星期天２、温度无论来源于何种有机体的细胞培养都需要一个与体内生存环境尽可能一致的生长条件，其中最基本的条件之一是恒定的和适宜的温度环境。人和哺乳动物培养细胞的最适温度在35～37℃，偏离这一温度范围，细胞的正常代谢和生长将会受到影响，甚至导致死亡。培养的细胞对低温的耐受力比对高温强。（五）细胞在体外生长的其它条件第72页,共97页，2024年2月25日，星期天高温的影响：温度上升不超过39℃时，细胞的代谢强度与温度成正比。细胞在39～40℃中培养1h，即会受到一定损伤，但仍能恢复。当在41～42℃的温度条件下培养1h，细胞则会受到严重损伤，但不致于全部死亡，部分仍可能恢复。当温度达43℃以上时，细胞大多死亡。（五）细胞在体外生长的其它条件２、温度第73页,共97页，2024年2月25日，星期天低温的影响：对于温度低于正常范围的环境，总的来说，只要温度不低于0℃时，低温只能抑制细胞代谢，并无伤害作用。细胞在25～35℃条件下仍能生存和生长，但速度缓慢。若将培养的细胞放