分子克隆流程手册.pdf

2017-10-06 约8.27万字 26页立即下载

分子克隆基本流程及技术原理.doc 分子克隆主要技术：（1）限制性内切酶酶切与连接基因克隆也叫DNA分子克隆，即在体外重组DNA分子，而实现该技术的关键是一种被称作限制性核酸内切酶的工具酶。每一种限制性核酸内切酶可以识别DNA分子上特定的碱基序列，切断DNA分子。依据碱基互补的原理，在DNA连接酶的作用下可以把切开的DNA片段连接起来，因此可以把目的片段连接到合适的载体上形成重组子。（2）转化与转染作为表达载体，必须具有复制起始序列、多克隆位点及选择标记，可以在宿主细胞中进行自我复制或整合到宿主基因组中进行复制。作为宿主的工程菌或细胞在某些化学条件或物理刺激下会改变其细胞膜的通透性，从而易于将细胞表面附着的外源基因吸收到

2017-06-07 约小于1千字 2页立即下载

余功臣(分子克隆)余功臣(分子克隆).doc 分子克隆技术实验报告应用生物技术0801 2008304201308 余功臣 2011年5月22日说明实验是由小组成员集体完成，实验报告以及结果分析由个人完成。小组成员：余功臣、晏星、何一鸣、伍良伟。试验时间由2011年5月8日至5月14日，共完成分子克隆、分子杂交和基因表达检测三大部分的实验。下列实验报告中的实验试剂具体成分以及配置方式均未列出，详见《分子克隆技术实验手册》附录。一．将M812载体上的水稻DNA片段亚克隆于pUC19载体上摘要运用碱裂解法抽提质粒载体pUC19和带有水稻目的DNA片

2017-01-03 约1.53万字 23页立即下载

2分子克隆幻灯片.ppt 第二章 DNA克隆技术本章，我们讨论4个问题： 1. 什么是DNA克隆技术——DNA克隆技术的概念。 2. 为什么能进行DNA克隆技术——DNA克隆技术的原理和技术路线。 3.怎样进行DNA克隆技术——DNA克隆技术的步骤（DNA体外重组，重组DNA导入宿主细胞后扩增和表达，基因工程后处理） 4. DNA克隆技术的应用和前景——对于医学来说即生产基因工程产品、开展基因治疗等。 DNA克隆/ 基因克隆/ 分子克隆 将重组的DNA通过一定方式导入宿主细胞内，并且在宿主细胞中进行复制扩增，形成大量与亲代分子完全相同的子代DNA分子的过程。克隆的含义 DNA克隆：

2016-08-10 约1.45万字 106页立即下载

《分子克隆指南》（上）.pdf

2018-04-05 约小于1千字页立即下载

分子克隆常用的工具酶.ppt 核酸酶BAL31從線形DNA分子兩端（粘端/平端）以漸進方式切去單核苷酸，以形成寡聚核苷酸或製造末端缺失。此外也有類似於SI酶單鏈特異降解活性，可除去粘性末端或單鏈髮夾結構。外切核酸酶Ⅲ能從線性DNA的3′-OH末端沿3′→5′方向切去單核苷酸，製造3′端缺失，製備DNA範本或特異DNA探針。T4多聚核苷酸激酶能將ATP上的γ位磷酸轉移到單鏈或雙鏈DNA或RNA的5′-OH上，可將γ-32P-ATP中的32P連接到5′端的5′-OH上，以完成寡聚核苷酸的核素標記。????分子克隆常用的工具酶第一節???????限制性核酸內切酶與DNA分子的體外切割第二節???????DNA連接酶和DNA分子

2025-04-04 约3.57千字 41页立即下载

分子克隆常用的载体.ppt 第三節???????真核細胞的克隆載體一、在酵母細胞中克隆基因常用的載體（共同特點）1.整合型載體（YIP）2.複製型載體（YRP）3.附加體型載體（YEP）二、植物基因克隆的載體——Ti質粒三、動物細胞基因克隆的載體整合型載體（YIP）YIP型載體是由大腸桿菌質粒和酵母的DNA片段構成的。如Pyeleu10是由ColEI質粒和酵母DNA提供的亮氨酸基因（Leu2+）片段構成，在細菌中複製、擴增，進入酵母後可整合表達。YIP型載體的特點是轉化率低(只有1-10轉化子/微克DNA)，但轉化子遺傳性穩定穩定，多用於遺傳分析工作。複製型載體（YRP）YRP型載體是帶有選擇標記和複製子的酵母的DNA片

2025-04-04 约6.52千字 72页立即下载

《多酶切与分子克隆》课件.ppt 多酶切与分子克隆技术课程学习目标介绍掌握基本概念理解多酶切和分子克隆的基本原理、核心概念和关键技术。精通实验操作熟练掌握多酶切和分子克隆的实验流程，并能独立进行实验操作。拓展应用领域什么是多酶切多酶切的基本原理限制性内切酶的概念常用限制性内切酶种类限制性内切酶识别位点 DNA片段的切割机制多酶切实验的基本步骤酶切反应体系配置限制性内切酶的选择酶切反应条件优化 分子克隆技术简介 分子克隆的基本流程载体的选择与设计常用克隆载体类型质粒载体的结构特征目的基因的筛选基因克隆策略限制性内切酶连接 DNA连接酶的作用连接反应体系配置连接反应条件控制感受态细胞的制备化

2025-03-04 约小于1千字 58页立即下载

分子克隆实验.pdf pUC191.5kbDNApUC1301 pUC19 pUC1301 BamHI+KpnI pUC 1301 1.5kb

2017-09-22 约1.68万字 20页立即下载

分子克隆常规操作B.doc 分子生物学实验常规技术操作目录 1. 质粒提取 1.1 小提质粒 1.2 小量快提质粒鉴定： 1.3 大提质粒： 2. 酶切 2.1 制备型酶切 2.2 小量酶切鉴定 2.3 DNA片段5突出端的补平 3. 琼脂糖凝胶电泳 4. 回收 4.1 从低熔点琼脂糖凝胶中回收DNA片段 4.2 小量胶回收DNA片段试剂盒操作（见操作手册） 4.3 无水乙醇沉淀回收 5. 连接 5.1 一般连接 5.2 平端动态连接 6. 转化 6.1 质粒快速转化 6.2 连接物转化 7. 制普通固体培养板 8. 涂板

2017-03-05 约1.29万字 13页立即下载

(精)分子克隆技术.ppt 分子克隆技术 * * 分子克隆（molecular cloning）又称为基因克隆、基因工程、DNA克隆、重组DNA技术克隆（Clone）指通过无性繁殖过程所产生的与亲代完全相同的子代群体。 分子克隆 指按照人的意愿，在体外将某种生物的DNA片断插入到载体（质粒、病毒等）中，形成遗传物质的新组合---重组DNA分子（重组子），然后将重组子转移到宿主细胞中进行复制或表达，即对DNA分子进行克隆，以获得该DNA分子的大量拷贝。基本原理：将编码某一多肽或蛋白质的基因（外源基因）组装到细菌质粒（质粒是细菌染色体外的双链环状DNA分子）中，再将重组质粒转入大肠杆菌，这样

2017-01-05 约1.57千字 13页立即下载

第五讲 分子克隆载体.ppt 基因操作的基本步骤载体单独一个包括启动子、编码区和终止子的基因，或者组成基因的某个元件，一般是不易进入受体细胞的，即使采用理化方法进入细胞后，也不容易在受体细胞内维持。载体(vector): 能携带外源基因（或DNA片段）进入细胞复制、整合或表达的工具。作为克隆载体的DNA分子具备的条件： 1 具有对受体细胞的可转移性，能携带外源基因进入宿主细胞； 2 能在宿主细胞中自主复制，并实现外源基因的增殖； 3 具有由单一限制酶识别位点组成的多克隆位点(MCS）； 4 克隆载体必须具有用于选择克隆子的标记基因； 5 克隆载体必须是安全的，

2019-05-04 约6.99千字 68页立即下载

3 第三讲1 分子克隆载体.ppt ;目的基因;基因操作的基本步骤;载体;;;;;; ;;;;质粒的基本性质：1 复制;;;3 质粒的转移性;构建质粒载体的基本原则;构建质粒载体的基本原则;构建质粒载体的基本原则;构建质粒载体的基本原则;构建质粒载体的基本原则;构建质粒克隆载体的基本策略;;质粒的命名;; pBR322的大小是4361bp的环状双链DNA，其碱基序列已经全部清楚。是最早应用于基因工程的载体之一。含有24种限制酶的单一识别位点，具有四环素抗性基因(tetr)和氨苄青霉素抗性基因(ampr)。将质粒pSF124中含ampr基因的DNA片段和质粒pSC101中含tetr基因的DNA片段同

2017-04-17 约1.35千字 68页立即下载

分子克隆工具酶.ppt S1核酸酶的基本特性 Ca2+ 5‘ dNMPs 或 5‘ NMPs ssDNA or RNA Ca2+ Ca2+ 5、单链内切双链外切的核酸酶：Bal31核酸酶 Bal31核酸酶的基本用途：诱发DNA突变 EcoRI A B C EcoRI EcoRI B C A Bal31 B C A 环化 A C ① ?链有反转录活性和 RNaseH活性。 RNaseH： ?链经过蛋白酶水解后产生的一条多肽。以5’?3’或3’?5’方向特异地水解RNA-DNA杂交双链中的RNA链。 RNaseH RNA DNA RNA DNA （3）逆转录酶的用途 ② ?链 RNA-DNA杂交双链中5’

2017-05-25 约1.49万字 118页立即下载

《分子克隆》课件.pptx 基因工程GeneticEn;基因工程课程内容5234;用于基因克隆的载体DNA的体外;质粒载体1噬菌体或病毒载体2人;重要的噬菌粒载体：pUC118;重要的噬菌粒载体：pBlues;人类、动物、植物的全基因组序列;酵母人工染色体（YeastA;酵母人工染色体的使用：pYAC;细菌人工染色体（Bacteri;优点：能携带大片段DNA，约3;2.1用于基因克隆的载体质;克隆载体DNA的体外重组（切与;基因工程的操作过程切接转增检;DNA的体外重组（切、接）T4;限制性核酸内切酶的功能与类型1;限制性核酸内切酶的类型主要特性;2、II型限制性核酸内切酶识别;II型“限切酶”的识别与切割;II型“限制

2025-05-25 约1.3千字 82页立即下载