猪圆环病毒2型Rep基因真核表达载体的构建和免疫原性分析.PDF

上海农业学报　２０１６，３２（１）：６９ ＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅＳｈａｎｇｈａｉ ＤＯＩ：１０．１５９５５?ｊ．ｉｓｓｎ１０００３９２４．２０１６．０１．０２ 文章编号：１０００３９２４（２０１６）０１００６０４ ２ Ｒｅｐ 猪圆环病毒 型 基因真核表达载体的构建和 免疫原性分析 １，２ ２ ２ ２ １，２ １，２ １，２ 　 ， ， 　 ， ， ， 　 ， 王 静 刘成倩 李 红 易建中 于宗幸 陈 磊 孙晓云 １ ２ （ ， ２０１３０６； ， ２０１１０６） 上海海洋大学水产与生命学院 上海 上海市农业科学院畜牧兽医研究所 上海 　 ： ＧｅｎＢａｎｋ ２ （ＰＣＶ２） １ ， ＰＣＲ 摘 要 根据 发表的猪圆环病毒 型 基因序列设计并合成 对特异性引物 进行 扩 ， ＰＣＶ２ ＰＣＶ２Ｒｅｐ ， ＰＣＲ ， ｐＥＧＦＰＣ１ ， 增 从 突变株中扩增出 基因 对 扩增产物清洁后进行双酶切 连接到 载体上 转 ＤＨ５ ， ＰＣＲ ， 。 化到大肠杆菌 α感受态细胞中 经 筛选和测序后鉴定出正确的重组基因 完成真核表达载体的构建 ＰＫ１５ ， ＤＮＡ，ＰＣＲ Ｒｅｐ ， 。 将重组质粒转染到 细胞中 收取病毒液抽提 检测到 基因 证明转染是成功的 进行间接免 ， Ｒｅｐ ＰＫ１５ ， Ｒｅｐ 。 疫荧光试验 可以检测 基因在 细胞中的表达 试验结果很好的验证了 基因的免疫原性 这为进一 步研究ＰＣＶ２的生物学活性及ＰＣＶ２新型疫苗奠定了坚实的基础。 ： ２ ；Ｒｅｐ ； ； 关键词 猪圆环病毒 型 基因 真核表达载体 间接免疫荧光 中图分类号：Ｓ８５２．６５　　文献标识码：Ａ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｏｆｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２Ｒｅｐｇｅｎｅ １，２ ２ ２ ２ １，２ １，２ １，２ ＷＡＮＧＪｉｎｇ ，ＬＩＵＣｈｅｎｇｑｉａｎ，ＬＩＨｏｎｇ，ＹＩＪｉａｎｚｈｏｎｇ ，ＹＵＺｏｎｇｘｉｎｇ ，ＣＨＥＮＬｅｉ ，ＳＵＮＸｉａｏｙｕｎ １ ２ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｉｓｈｅｒｉｅｓａｎｄＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｈａｎｇｈａｉＯｃｅａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔ