高免疫原性骨桥蛋白的构建、表达及鉴定.pdf

·480· ·论著· 高免疫原性骨桥蛋白的构建、表达及鉴定 汤伟松孟琴刘亮 李淑珍唐晓波 【摘要】 目的重组及表达高免疫原性骨桥蛋白(OPN)的融合蛋白。方法使用Lasergene软件 分析OPN基因，选取出免疫原性高的区域作为目的片段。提取总RNA，应用逆转录、PCR等技术扩增 OPN基因目的片段，将其分别与带有His标签的pET·32a及GST标签的pGEX-4T一1载体连接。构建表 达载体，诱导表达OPN融合蛋白(分别含有His，GST．Tag)，并进行SDS—PAGE及Western blotting鉴定。 结果扩增后获得一条351bp的DNA片段，经测序鉴定为目的片段序列，并实现了可溶性高表达，经 Western blotting鉴定为高免疫原性OPN融合蛋白。结论’采用原核表达经纯化后可获得高纯度高免疫 原性的OPN融合蛋白，为进一步开发．OPN诊断试剂打下基础。 【关键词】骨桥蛋白；肝癌；高免疫原性区 Constructionand of fusion TANG expressionhigh immunogenicosteopontinproteins Wei—song，MENG Shu—zhen，TANG of Qin，LIULiang，LI Xiao·bo．DepartmentBiopharmaceuticalScience，CollegeofPharmacy， HarbinMedical 15008 1，China University，Harbin author：TANG Corresponding Xiao—bo，E—mail：ty6163@aliyun．eom．cfl Tocloneand with 【Abstract】0bjeetiveexpressosteopontin(OPN)fusionproteinshJ【ghimmunogenic— OPN was a wasselected ity．Methodsgene analyzedusingLasergenesoftware，andhighimmunogenicregion as ofthe wasclonedRT—PCRfromtotal fragment．Thefragment RNA，The target targetgene by amplifiedgene wasinsertedintovectors and recombinantwereconstructedand pET-32apGEX-4T一1．，11le plasmids expressed and identifiedSDS—PAGEandWestern proteins(includingHis-TagGST—Tag，respectively)wereby blotting． ResultsADNAbandabout351 wasconfirmedas OPN DNA ex— bp target fragmentby sequencing．Soluble was of OPNfusion wa