非洲猪瘟病毒p54蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性分析 .pdf

中国动物传染病学报2023,31(4):164-169ChineseJournalofAnimalInfectiousDiseases

·研究论文·

非洲猪瘟病毒p54蛋白在昆虫细胞中的

表达及其免疫原性分析

1,2222222

敖清莹，钟秋萍，史馨瑾，魏常青，刘英楠，廖欣欣，谢振华，

112

钱莺娟，郑龙三，陈鸿军

（1.南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室农业农村部细菌学重点实验室，

南京210095；2.中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241）

摘要：非洲猪瘟病毒（ASFV）p54蛋白由晚期基因E183L编码，是主要的结构蛋白之一。为了获得免疫原性强的p54蛋白，

E183Lµ

本研究将基因克隆至pFastBac1载体中，取1g重组质粒转座DH10Bac感受态细菌，经三轮蓝白斑筛选后，获得重组

Bacmid-p54。将提取的Bacmid-p54质粒DNA转染Sf9细胞，出现明显病变后，收获细胞培养上清，在正常Sf9细胞中传三代，获

得的杆状病毒命名为rBac-P54。利用SDS检测rBac-P54感染后昆虫细胞的蛋白表达情况，并通过间接免疫荧光（IFA）和

Western-blot鉴定p54蛋白的免疫原性。结果显示，在感染的Sf9细胞中，p54蛋白能获得高效表达，并可被ASFV阳性血清特异性

识别。这表明杆状病毒系统表达的p54蛋白具有良好的免疫原性，为后续开展非洲猪瘟血清学诊断和p54功能研究奠定基础。

关键词：非洲猪瘟病毒；p54蛋白；昆虫细胞表达系统；免疫原性

中图分类号：S852.651文献标志码：A文章编号：1674-6422（2023）04-0164-06

ExpressionandIdenticationofAfricanSwineFeverVirusp54byBaculovirusfi

ExpressionSystem

1,222222

AOQingying,ZHONGQiuping,SHIXinjin,WEIChangqing,LIUYingnan,LIAOXinxin,

2112

XIEZhenhua,QIANYingjuan,ZHENGLongsan,CHENHongjun

HealthandFoodSafetyCollegeofVeterinaryMedicine,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China;2.ShanghaiVeterinaryResearch

Institute,CAAS,Shanghai200241,China)

Abstract:

infectinsectcellsandtheproteinexpressionwasexaminedinSDS,indirectimmunouorescencean