GB/T 9695.26-1991肉与肉制品　维生素A　含量测定.pdf

中华人民共和国国家标准 肉与肉制品 维生素A 含量测定 GB/T 9695.26-91 Meat and meat products-Method for determination of vitamin A content ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 1 主题内容与适用范围 本标准规定了肉和肉制品中维生素A 含量的测定方法。 本标准适用于肉和肉制品中维生素A 含量的测定。 2 引用标准 GB 9695.19 肉与肉制品 取样方法 3 原理 样品皂化后,用石油醚提取不皂化的维生素A,浓缩后,用高效液相色谱荧光检测器, 激发波长340nm,发射波长460nm,分离测定维生素A,用标准外标法计算样品中维生素A 的 含量。 4 试剂 除特别标明外所用试剂全为分析纯,所用水应为蒸馏水或同等纯度的水。 4.1 氢氧化钾(GB 2306):50 ％溶液; 4.2 抗坏血酸:10％溶液; 4.3 无水乙醇(GB 678); 4.4 石油醚:沸程30～60℃; 4.5 无水硫酸钠; 4.6 异丙醇; 4.7 甲醇(GB 683):重蒸后使用; 4.8 维生素A 标准溶液:0.2mg/mL 称取维生素A 标准品10.0mg,用异丙醇溶解,移至50mL 棕色容量瓶中,用异丙醇稀至刻 度。 当天配制。 5 仪器和设备 5.1 实验室常规设备; 5.2 绞肉机:孔径不超过4mm; 5.3 旋转蒸发器; 5.4 液相色谱仪,带荧光检测器; 5.5 色谱柱:十八烷基键合固定相柱或其他能分离维生素A 的柱子。 6 试样 6.1 按GB 9695.19 取样。 6.2 取有代表性的试样200g,于绞肉机中至少绞两次使其混匀,试样应尽快分析。 7 分析步骤 7.1 皂化 维生素A 易被光破坏,试验应避光操作。 称取0.5～5g 试样于150mL 棕色皂化瓶中,加入10％抗坏血酸溶液5mL,50 ％氢氧化钾 溶液15mL,乙醇30mL 混匀,于80℃水浴上回流加热30～60min,使试样溶液清澈,完全皂化 后于流水中冷却。 7.2 提取 将皂化后的试样溶液移入 125mL 分液漏斗中,用 30mL 石油醚分数次洗皂化瓶,洗液并 入 分液漏斗中,塞上塞子,轻摇分液漏斗,避免乳化。静置,待分层后,将水层放入第二个分液 漏斗中,醚层留在第一个分液漏斗中。于第二个分液漏斗中倒入10mL 石油醚,进行第二次提 取,如此进行3～4 次,石油醚层交入第一个分液漏斗中。 石油醚层反复用水洗涤,直至水层不呈碱性(用pH 试纸检查)为止,弃去水层。将分液 漏斗中石油醚层经过无水硫酸钠脱水,滤入干燥的棕色圆底烧瓶中。再用石油醚洗涤无 水硫酸钠和分液漏斗,洗液并入棕色圆底烧瓶中。 7.3 分析试样的准备 将盛有石油醚提取液的圆底烧瓶与旋转蒸发器连接,于50～60℃水浴上减压回收石油 醚,待瓶内只剩约1～2mL 液体时,取下烧瓶,用氮气吹干剩余液体，立即加入2.0mL 异丙醇 溶液,摇匀,溶解瓶中维生素A,塞上塞子, 以防溶剂挥发,此为色谱分析样液。 7.4 测定 7.4.1 维生素A 标准曲线的绘制 取维生素A 标准溶液1,2,3,4,5,6,7,8mL 进行高效液相色谱(HPLC)分析,记录峰面积或 峰高, 以维生素A 量为横坐标,峰高或峰面积为纵坐标绘制标准曲线。 若样品中维生素 A 含量很低,可取维生素 A 标准溶液(0.2mg/mL)5mL,用异丙醇溶液定 容 至50mL 容量瓶中,此标准溶液浓度为0.02mg/mL 。 如前进行高效液相色谱(HPLC)分析,绘制标准曲线。 7.4.2 色谱分析参考条件 分析柱:十八烷基键合固定相柱式相同效用的柱; 流动相:甲醇/水 98/2; 流动相流速:1 mL/min; 检测器:荧光检测器Ex:340nm, Em:460nm; 进样量:试样液4～6 μL,记录峰面积或峰高。 8 分析结果的计算 A ×1 000 ×V0 计算公式 X = ───────