多星韭AwANSs基因克隆与表达分析及其应用研究.docx

多星韭AwANSs基因克隆与表达分析及其应用研究

目录

多星韭AwANSs基因克隆与表达分析及其应用研究（1）．．．．．．．．．．．．3

内容描述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.1研究背景．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3

1.2研究目的与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.3国内外研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

2.1多星韭材料来源与培养．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

2.2AwANSs基因的克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

2.2.1基因序列的检索与设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

2.2.2基因克隆策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

2.2.3PCR扩增与克隆验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

2.3基因表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15

2.3.1表达载体的构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

2.3.2转化与筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．18

2.3.3组织特异性表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

2.4功能验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

2.4.1生物信息学分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

2.4.2体外功能实验．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22

2.4.3体内功能实验．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

3.1AwANSs基因的克隆与序列分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25

3.2AwANSs基因的表达模式分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

3.3AwANSs基因的功能验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

3.3.1生物信息学预测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

3.3.2体外实验结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

3.3.3体内实验结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

多星韭AwANSs基因克隆与表达分析及其应用研究（2）．．．．．．．．．．．31

一、内容简述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

1.1多星韭的生物特性及经济价值．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

1.2AwANSs基因的研究现状及进展．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

1.3本研究的目的与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

二、研究方法与材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

2.1研究材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．37

2.1.1多星韭的采集与处理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

2.1.2实验室保存及培养条件．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

2.2基因克隆技术．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40

2.2.1总DNA的提取．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

2.2.2PCR