输血相容性检测.ppt

抗体鉴定谱红细胞：一般是由8-16人份的已知血型表现型O型红细胞组成，具有各种不同的抗原成分，根据谱红细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体。方法：在盐水法基础上、灵活应用白蛋白介质法、酶技术及抗人球蛋白实验。第23页，共33页，星期日，2025年，2月5日交叉配血主侧：受血者血清+供者红细胞检测对供者红细胞起反应的抗体次侧：受血者红细胞+供者血清检测对受者红细胞起反应的抗体自身对照：受血者红细胞+受血者血清排除自身抗体、直接抗球蛋白试验阳性及红细胞缗钱状凝集第24页，共33页，星期日，2025年，2月5日第1页，共33页，星期日，2025年，2月5日红细胞抗原抗体检测技术盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验酶介质凝集试验凝聚胺试验微柱凝胶免疫试验第2页，共33页，星期日，2025年，2月5日盐水介质凝集试验盐水介质中红细胞上的抗原决定簇与相应抗体分子上的抗原结合位点结合，交叉联结形成肉眼可见的凝集。用于IgM抗体的检出、鉴定、盐水配血试验以及血型的鉴定。当特异性的IgG类抗A、抗B的浓度足够大时，在盐水介质里也能与相应的红细胞发生凝集反应，与红细胞表面抗原位点数目和抗原决定簇位置有关。第3页，共33页，星期日，2025年，2月5日方法：玻片法-便于显微镜观察结果 试管法-适用于不同温度、便于洗涤反应温度：4～22℃临床意义：盐水凝集试验阳性，并在37℃也有活性的抗体有意义。室温有活性，37℃无活性者临床意义不大。优点：简便、快捷、直观。缺点：不能发现不完全抗体。盐水介质凝集试验第4页，共33页，星期日，2025年，2月5日抗人球蛋白试验是1945年由Coombs等人建立的，又称Coombs试验。抗人球蛋白试验的建立在血型血清学上有着非常重要的意义。分为直接抗人球蛋白试验（DAT）和间接抗人球蛋白试验（IAT）。抗人球蛋白试验第5页，共33页，星期日，2025年，2月5日IgG类血型抗体（主要是免疫抗体，如Rh血型抗体）分子量小，与红细胞相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，称之为不完全抗体，但在加入抗-IgG后，以其搭桥作用则可出现凝集反应。补体成分在体内被红细胞抗原抗体复合物激活以后，结合在红细胞表面。在体外含补体的多克隆抗体，或抗C3b、抗C3d等单特异性抗体与补体致敏的红细胞反应，使之凝集也称为抗球蛋白试验。抗人球蛋白试验原理第6页，共33页，星期日，2025年，2月5日DAT是检测体内致敏红细胞的一种方法，用于检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，尤其是IgG和C3d包被的红细胞。应用：HDN和自身免疫性溶血性贫血的诊断红细胞被药物抗体致敏的检查急性和迟发性溶血性输血反应的检查直接抗人球蛋白试验第7页，共33页，星期日，2025年，2月5日第8页，共33页，星期日，2025年，2月5日IAT是检测血清中不完全抗体的一种，用于测定在体外能引起红细胞致敏的抗体。应用：血型的鉴定，如Rh血型抗体的检出和鉴定交叉配血间接抗人球蛋白试验第9页，共33页，星期日，2025年，2月5日第10页，共33页，星期日，2025年，2月5日原理：红细胞表面有丰富的唾液酸，带有负电荷，是红细胞相互排斥的原理。蛋白水解酶能消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负电荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之间的间距，使IgG抗体分子能与有相应抗原的红细胞产生凝集常用的酶（0.5%）：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、无花果酶酶介质凝集试验第11页，共33页，星期日，2025年，2月5日优点：酶法能显著增强一些抗原抗体系统的反应活性，Rh和Kidd系统最明显缺点：①酶法处理RBC，蛋白酶会使RBC的抗原结构破坏和变性（M、N、Fya、Fyb）②操作繁复，少数人对酶液过敏酶介质凝集试验第12页，共33页，星期日，2025年，2月5日原理：凝聚胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有多个阳离子基团，能中和红细胞表面的负电荷，并借助正负电荷的作用，引起红细胞的非特异性凝集。当红细胞与血清在低离子介质中孵育后，IgG抗体与红细胞上相应的抗原结合在凝聚胺的作用下发生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能区分，再加入枸橼酸钠重悬液，枸橼酸根的负电荷与凝聚胺上的正电荷中和，非特异性凝集现象消失，而真正的凝集不会消失。凝聚胺试验第13页，共33页，星期日，2025年，2月5日第14页，共33