细胞化学成分显.ppt

细胞化学成分显示实验目的：1.了解细胞化学反应基本原理2.了解细胞内酸性蛋白和碱性蛋白、DNA和RNA分布状况3.熟练血涂片技术材料蟾蜍洋葱仪器和器材光学显微镜解剖器械载玻片染色缸水浴箱试剂70%乙醇5%三氯醋酸1%碱性固绿染液1%酸性固绿染液丙酮甲基绿-哌罗宁染液123456实验准备实验内容：细胞内酸性蛋白、碱性蛋白的显示细胞内DNA和RNA分布01洋葱表皮细胞03蟾蜍红细胞02一、酸性蛋白质、碱性蛋白质的显示原理：细胞内不同蛋白质分子中所带的碱性基团(-NH2)和酸性基团(-COOH)的数量不同，在不同PH溶液中，整个蛋白质所带静电荷多少也不同。在一定生理条件下：整个蛋白质所带的负电荷多（-COO-），就为酸性蛋白；其主要分布在细胞质中。整个蛋白质所带的正电荷多（NH3+），就为碱性蛋白，其主要分布在细胞核内。标本经三氯醋酸处理抽提掉核酸后，用不同pH值的固绿染液分别染色，使细胞内的碱性蛋白与酸性蛋白质显示出来。步骤：处死蟾蜍，制作三张蟾蜍血涂片，晾干。两张70%乙醇固定6min90℃、5%三氯醋酸、15min冲洗一张酸性固绿5-10min、另一张碱性固绿30-40min冲洗晾干、观察酸性蛋白：细胞质、核仁区域内的蛋白碱性蛋白：细胞核内组蛋白处死蟾蜍的方法：左手握住蟾蜍的身体和四肢，使其腹部贴着掌心，食指压住蟾蜍头部前端使其尽量腹屈。在头与躯干之间可触及一凹陷(即枕骨大孔所在处)，右手持解剖针直插入此凹陷约2mm，将针尖转向头侧插入颅腔捣毁脑组织。将解剖针向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。直至其四肢伸直、肌肉松驰为止。01将推片自血滴左侧向右移动02将推片自血滴左侧向右移动03当血滴均匀地附着在两片之间后，再将推片向左平稳地推移细胞内的DNA、RNA分布原理：核酸是呈酸性，与碱性染料甲基绿-哌罗宁是具有亲和力，这两种碱性染料有选择的特异染色，甲基绿把DNA染成绿色，哌罗宁把RNA染成红色。步骤：血涂片，70%乙醇固定6min晾干甲基绿-派罗宁滴染20min冲洗，吸干丙酮分色（沾2-3次）晾干观察一小块洋葱表皮甲基绿-哌罗宁滴染30-40min滴水冲洗盖片、观察蟾蜍血涂片：细胞质红色、核蓝绿色、核仁紫红洋葱表皮：细胞质红色、核绿色处死蟾蜍，制作三张蟾蜍血涂片，晾干。01两张70%乙醇固定6min90℃、5%三氯醋酸、15min冲洗一张酸性固绿5-10min、另一张碱性固绿30-40min冲洗晾干、观察02血涂片，70%乙醇固定6min晾干甲基绿-派罗宁滴染20min冲洗，吸干丙酮分色（沾2-3次）晾干观察03一小块洋葱表皮甲基绿-哌罗宁滴染30-40min滴水冲洗盖片、观察04*