植物生理学 实验6__种子生活力的测定.ppt

实验六 植物种子生活力的快速测定 实验目的 了解种子生活力快速测定的方法 理解TTC/BTB/染料法测定种子生活力的原理 种子生活力（seed viability）：指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。 种子活力（seed vigor）： TTC法 凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。 当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被NADH或NADPH还原时，可产生红色的三苯甲腙（TTF），胚便染成红色。 如种胚死亡便不被染色；如种胚生活力下降，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，染色较浅；故可根据种胚染色的部位或深浅来鉴定种子的生活力。 BTB溴麝香草酚蓝法 活细胞呼吸释放CO2， CO2溶于水成H2CO3解离，使种胚周围环境酸度增加，用BTB来反映酸度的改变； BTB变色范围为pH6.0-7.6，酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为pH7.1）。 本实验观察种胚周围的黄色晕圈。 染料染色法 有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选择吸收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内，胚部不染色。 而丧失生命力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收能力，染料可自由进入细胞内使胚部染色。所以可根据种子胚部是否被染色来判断种子的生命力。 染料染色法 材料、设备及试剂 （一）材料：小麦种子 （二）仪器设备：1. 小烧杯；2. 刀片；3. 镊子；4. 培养箱 （三）试剂： 1. 0.12％-0.5％TTC溶液（TTC可直接溶于水，溶于水后，呈中性，pH7±0.5，不宜久藏，应现用现配）。 2. 5％红墨水（酸性大红G） 3. BTB溶胶 BTB法 煮沸的1％BTB琼脂胶约15-20 ml，冷却倒胶至培养皿（1/2皿）； 取30粒完好的小麦种子，种胚向下插入胶(不软不硬)； 将培养皿置于35 ℃下培养 1hr，对光观察，如种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是死种子。 TTC/红墨水染色法 将种子用温水（30℃）浸泡2-6h，使种子充分吸胀； 随机取小麦种子30粒，沿种胚中央准确切开，取其一半TTC备用，另一半红墨水法备用； 将TTC备用的一半种子浸于5 ml TTC 中，于恒温箱（30-35℃）中保温30min； 将红墨水法的另一半种子用5 ml红墨水浸5 min（室温）； 染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色。倒出TTC / 红墨水，再用清水冲洗种子1-2次，观察种胚被染色的情况。 不同方法测定种子生活力统计表 注意事项 沿种胚中央准确切开，同粒TTC/红墨水法各一半 TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。 染色结束后立即进行鉴定，因放久会褪色。 注意事项 显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中 染色时间不能太长，否则不易区分。 注意事项 溶胶倒至培养皿1/2处； 取完好小麦种子，将种胚向下插入BTB琼脂胶。 思考题 三种方法测定种子生活力的理论依据有何不同? * * 实验原理 TTC还原反应如下： 氯化三苯基四氮唑 三苯甲腙 TTC法 实验步骤 30 TTC 30 红墨水 ? ? ? ? ? ? 30? ? BTB ? 有生活力种子 占供试粒数的% 无生活力 种子粒数 有生活力种子粒数 供试粒数 方法 数据记录与处理 * * *