植物生理学 实验6__种子生活力的测定.ppt
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实验六 植物种子生活力的快速测定 实验目的 了解种子生活力快速测定的方法 理解TTC/BTB/染料法测定种子生活力的原理 种子生活力(seed viability):指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。 种子活力(seed vigor): TTC法 凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应,而无生活力的种胚则无此反应。 当TTC溶液渗入种胚的活细胞内,并作为氢受体被NADH或NADPH还原时,可产生红色的三苯甲腙(TTF),胚便染成红色。 如种胚死亡便不被染色;如种胚生活力下降,呼吸作用明显减弱,脱氢酶的活性亦大大下降,染色较浅;故可根据种胚染色的部位或深浅来鉴定种子的生活力。 BTB溴麝香草酚蓝法 活细胞呼吸释放CO2, CO2溶于水成H2CO3解离,使种胚周围环境酸度增加,用BTB来反映酸度的改变; BTB变色范围为pH6.0-7.6,酸性呈黄色,碱性呈蓝色,中间经过绿色(变色点为pH7.1)。 本实验观察种胚周围的黄色晕圈。 染料染色法 有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性,有选择吸收外界物质的能力,一般染料不能进入细胞内,胚部不染色。 而丧失生命力的种子,其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收能力,染料可自由进入细胞内使胚部染色。所以可根据种子胚部是否被染色来判断种子的生命力。 染料染色法 材料、设备及试剂 (一)材料:小麦种子 (二)仪器设备:1. 小烧杯;2. 刀片;3. 镊子;4. 培养箱 (三)试剂: 1. 0.12%-0.5%TTC溶液(TTC可直接溶于水,溶于水后,呈中性,pH7±0.5,不宜久藏,应现用现配)。 2. 5%红墨水(酸性大红G) 3. BTB溶胶 BTB法 煮沸的1%BTB琼脂胶约15-20 ml,冷却倒胶至培养皿(1/2皿); 取30粒完好的小麦种子,种胚向下插入胶(不软不硬); 将培养皿置于35 ℃下培养 1hr,对光观察,如种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子,否则是死种子。 TTC/红墨水染色法 将种子用温水(30℃)浸泡2-6h,使种子充分吸胀; 随机取小麦种子30粒,沿种胚中央准确切开,取其一半TTC备用,另一半红墨水法备用; 将TTC备用的一半种子浸于5 ml TTC 中,于恒温箱(30-35℃)中保温30min; 将红墨水法的另一半种子用5 ml红墨水浸5 min(室温); 染色结束后要立即进行鉴定,因放久会褪色。倒出TTC / 红墨水,再用清水冲洗种子1-2次,观察种胚被染色的情况。 不同方法测定种子生活力统计表 注意事项 沿种胚中央准确切开,同粒TTC/红墨水法各一半 TTC溶液最好现配现用,如需贮藏则应贮于棕色瓶中,放在阴凉黑暗处,如溶液变红则不可再用。 染色结束后立即进行鉴定,因放久会褪色。 注意事项 显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中 染色时间不能太长,否则不易区分。 注意事项 溶胶倒至培养皿1/2处; 取完好小麦种子,将种胚向下插入BTB琼脂胶。 思考题 三种方法测定种子生活力的理论依据有何不同? * * 实验原理 TTC还原反应如下: 氯化三苯基四氮唑 三苯甲腙 TTC法 实验步骤 30 TTC 30 红墨水 ? ? ? ? ? ? 30? ? BTB ? 有生活力种子 占供试粒数的% 无生活力 种子粒数 有生活力种子粒数 供试粒数 方法 数据记录与处理 * * *
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