紫花苜蓿低温诱导蛋白MsLTI65的分离及抗逆性研究.docx

紫花苜蓿低温诱导蛋白MsLTI65的分离及抗逆性研究

目录

紫花苜蓿低温诱导蛋白MsLTI65的分离及抗逆性研究（1）．．．．．．．．．4

内容综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1研究背景．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.2研究目的与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

1.3国内外研究现状．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7

材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9

2.1紫花苜蓿低温诱导蛋白MsLTI65的克隆与表达．．．．．．．．．．．．．．．10

2.1.1基因克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12

2.1.2表达载体的构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

2.1.3表达产物的纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

2.2低温诱导蛋白MsLTI65的分离纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16

2.2.1低温诱导条件优化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17

2.2.2分离纯化方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19

2.2.3蛋白质活性检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

2.3抗逆性研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

2.3.1抗逆性实验设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．23

2.3.2抗逆性评价方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24

2.3.3数据分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

3.1MsLTI65蛋白的表达与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．28

3.1.1蛋白表达产物的鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

3.1.2蛋白纯度分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30

3.2低温诱导条件下MsLTI65的分离纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

3.2.1低温诱导效果评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

3.2.2蛋白分离纯化效果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33

3.3MsLTI65蛋白的抗逆性研究．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．34

3.3.1低温胁迫下MsLTI65的活性变化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．36

3.3.2抗逆性相关基因表达分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

3.3.3抗逆性机制探讨．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．39

紫花苜蓿低温诱导蛋白MsLTI65的分离及抗逆性研究（2）．．．．．．．．40

一、内容概要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41

1.2研究目的与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．42

1.3研究方法与技术路线．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

二、材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．44

2.1实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45

2.1.1紫花苜蓿品种选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45

2.1.2栽培条件．．．．．．．．．．