流式细胞术课件课件.ppt

第31页,共61页，星期六，2024年，5月淋巴细胞亚群检测第32页,共61页，星期六，2024年，5月淋巴细胞亚群T淋巴细胞(CD3+)名称功能CD3+CD4+辅助性/诱导性T细胞(Th/Ti)辅助和诱导细胞免疫和体液免疫CD3+CD4+CD29+CD3+CD4+CD29-辅助性T细胞(Th)诱导性T细胞(Ti)辅助细胞免疫和体液免疫诱导细胞免疫和体液免疫CD3+CD8+抑制性/杀伤性T细胞(Ts/Tc)抑制免疫反应/杀伤异源细胞CD3+CD8+CD28-CD3+CD4+CD29-抑制性T细胞(Ts)杀伤性T细胞(Tc)抑制细胞和体液免疫细胞毒性T细胞CD3+CD4+CD8+活化的T细胞在T细胞恶性增生时升高CD3+CD4-CD8-有调节功能的T细胞,其表达?/?T细胞受体(TCR?/?)CD4+/CD8+比值CD45RA+CD45RO-幼稚的/静止的T淋巴细胞当免疫系统没有能力更新辅助性或抑制性/细胞毒性淋巴细胞的祖细胞时此细胞亚群较低CD45RA-CD45RO+记忆性T淋巴细胞病菌感染时升高,但在慢性病毒感染,如HIV患者中降低CD45RA+CD45RO+活化的T细胞,感染时升高感染时升高第33页,共61页，星期六，2024年，5月Th1/Th2细胞第34页,共61页，星期六，2024年，5月2、造血干/祖细胞的检测CD34+造血干/祖细胞的检测，主要用于干细胞移植及基因治疗方面的检测。第35页,共61页，星期六，2024年，5月3、白血病免疫分型白血病和淋巴瘤的MIC分型：即形态（M）、免疫分型（I）、细胞遗传学（C）检测，免疫分型是重要的检测项目之一。FCM通过检测细胞表面或胞浆特异性的标记表达来对白血病进行免疫分型。第36页,共61页，星期六，2024年，5月（二）红细胞疾病诊断网织红细胞计数与应用网织红细胞是未成熟的红细胞，胞浆中残留有RNA，RNA含量越高，网织红细胞越幼稚。网织红细胞反映骨髓造血。用荧光染料噻唑橙(ThiazoleOrange，TO)染色网织红细胞中RNA，用488nm激光激发后发射绿色荧光，其荧光强度反映网织红细胞的RNA含量。用于贫血筛查。临床意义1、骨髓功能正常而网织红细胞增加，多见于内源性溶血性疾病，如镰状细胞溶血性贫血、地中海贫血等。2、网织红细胞正常或减少，多见于红细胞造血系统受损，病因是骨髓内红细胞成熟或生成异常，3、对病人的治疗管理：评估用药后病人的反应情况，监测骨髓移植过程，检测化疗和放疗对造血功能的损害。4、睡眠性血红蛋白尿症(PNH)的诊断，红细胞表面CD59缺失。第37页,共61页，星期六，2024年，5月阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）的发病机制为X染色体上的PIG-A基因发生突变，引起糖化肌醇脂（GPI）锚合成障碍，使GPI锚连蛋白缺乏，已证实的GPI锚连蛋白有10余种，用于PNH诊断的主要为CD55和CD59两种，如果在红细胞上出现CD55或/和CD59的减少，可诊断为PNH。（二）红细胞疾病诊断第38页,共61页，星期六，2024年，5月（三）细胞内蛋白检测细胞内细胞因子染色（ICS）：标本（PBMC）刺激剂＋抑制细胞因子分泌[BFA或莫能菌素(Monensin)]固定（多聚甲醛）打孔（破膜剂）荧光标记：IFN-γ-FITC，IL-4-PE，CD3-Pro-CP，CD8-APC。第39页,共61页，星期六，2024年，5月CBA(CytometricBeadArray，微球阵列法)，同时检测多种因子(最多可同时检测8种)。（四）可溶性蛋白CBA技术与传统的ELISA相比有下列优点：

1、CBA技术是一种“多元”和“同步”的检测技术。

2、CBA所需样本仅为ELISA所需样本量的1/6。

3、CBA的灵敏度与ELISA相当，但稳定性更好。

4、对混合物做一次流式检测，可得到多种指标的数据。

5、能避免由于酶联放大技术使信号失真导致的假象。

6、CBA实验时间比单次ELISA大大缩短。第40页,共61页，星期六，2024年，5月捕获微球捕获抗体+CBA技术检测胞外细胞因子+待分析的产物荧光检测抗体第41页,共61页，星期六，2024年，5月CBA0pg/mL80pg/mL1250pg/mL5000pg/mL第42页,共61页，星期六，2024年，5月（五）细胞功能检测1、细胞DNA分析：细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡、