腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的实验研究.PDF

基因时代()——打造中国生物医学第一网! · 74 · ChinJGastroenterol，2009，Vo1．14，No．2 · 论 著 · 腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株 SMMC7721凋亡的实验研究术 朱黎明 涂水平 姚玮艳 乔敏敏 江石湖 上海交通大学医学院附属瑞金 医院消化 内科 (200025) 背景：X连锁凋亡抑制蛋 白(XIAP)相关因子 1(XAF1)是新近鉴定的肿瘤抑制基 因，在许多人类恶性肿瘤中低表 达甚至不表达。目的：研究Ad5／F35腺病毒介导 XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的作用及其可能机制 。 方法 ：构建重组腺病毒 Ad5F／35一XAFI、对照病毒 Ad5F／35一Null和报告病毒 Ad5F／35一增强型绿色荧光蛋 白(EGFP)，分 别按不 同感染复数 (MOI)在同一作用时问点感染人肝癌细胞株 SMMC7721。以荧光显微镜和流式细胞仪检测 Ad5／ F35一EGFP的感染效率 ；分别以逆转录聚合酶链反应 (RT．PCR)和蛋白质印迹法检测 XAF1mRNA和蛋白表达 ；以甲基 噻唑基四唑 (MTr)法检测细胞增殖率 ：以AnnexinV—FITC／PI双染法和原位末端标记TUNEL法检测细胞凋亡率 ；以蛋 白质印迹法检测凋亡相关蛋 白caspase一3、caspase8和caspase．9的表达。结果 ：Ad5／F35一EGFP感染 48h，MOl为2．0 时 ，92％以上的 SMMC7721细胞表达绿色荧光蛋 白。Ad5／1735一XAF1感染 48h后．SMMC7721细胞 中XAF1mRNA和 蛋 白表达增高，细胞增殖受到抑制，细胞凋亡剂量依赖性地增多，并伴随凋亡相关蛋 白caspase一3、caspase．8和 caspase一9的裂解 。结论 ：重组腺病毒 Ad5F／35XAF1在人肝癌细胞株SMMC7721中具有很强的感染效率 ，可促进 XAF1基 因表达，且能明显抑制人肝癌细胞增殖和诱导凋亡 ，此作用可能与XAF1激活了内、外源性凋亡通路有关。 关键词 x连锁凋亡抑制蛋 白质 ； 腺病毒科 ； 肝肿瘤 ； 细胞凋亡 Adenovirus-mediatedXAF1GeneExpression InducesApoptosisin HumanHepatocellularCarcinomaCellLine SMMC7721 ZHULiming,TUShuiping,YA0Weiyan，QtA0Minmin，JIANGShihu．DepartmentofGastroenterology, RajiinHospital，ShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicine，Shnaghai (200025) Correspondenceto：TU Shuiping，Email：tushuiping@yahoo．con Background：X—linkedinhibitorofapoptosis(XIAP)一associatedfactor1(XAF1)isanoveltumorsuppressorgene identifiedanditsexpressionisfoundatextremelylow leveloreven undetectableinmostofhumanmalignanttumors． Aims：Toinvestigatetheeffectandmechanism ofadenovirusvectorAd5／F35一mediatedXAF1geneexpressiononinducing apoptosisin human hepatocellularcarcinomacelllineSMMC7721． Methods： RecombinantvintsAd5／F35一XAF1， controlledvirusAd5／F35一NullandreportvirusAd5／F