微生物基因工程育种2.ppt

人工染色体载体细菌人工染色体（BacterialArtificialChromosomesBAC）细菌人造染色体通常是在大肠杆菌性因子F质粒的基础上构建的，其装载量范围在50-300kb之间各种类型的pBACs在大肠杆菌受体菌只能维持单一拷贝pBACs主要适用于：克隆大型基因簇（genecluster）结构构建动植物基因文库人工染色体载体酵母人造染色体（YeastArtificialChromosomesYAC）YAC载体应含有下列元件：酵母染色体的端粒序列酵母人造染色体的构建：pYAC4CEN4EcoRIURA3TELBamHITELoriAprTRP1ARS1酵母染色体的复制子酵母染色体的中心粒序列酵母系统的选择标记大肠杆菌的复制子大肠杆菌的选择标记YAC载体的装载量为350-400kbC用于基因转移的受体菌或细胞3基因工程的基本条件各种基因工程受体的特性实验室常用的基因工程受体受体细胞应具备的条件受体细胞应具备的条件限制性缺陷型外切酶和内切酶活性缺陷（recB-，recC-，hsdR-）重组整合缺陷型用于基因扩增或高效表达的受体细胞（recA-）具有较高的转化效率具有与载体选择标记互补的表型各种基因工程受体的特性大肠杆菌遗传背景清楚，载体受体系统完备，生长迅速，培养简单，重组子稳定适用于外源DNA扩增和克隆、原核生物基因的高效表达、基因文库的构建，是DNA重组实验和基因工程主要受体菌产结构复杂、种类繁多的内毒素SCIENCEVOL.2775SEPTEMBER1997各种基因工程受体的特性枯草芽孢杆菌遗传背景清楚，蛋白质分泌机制健全，生长迅速，培养简单，不产内毒素适用于原核生物基因的克隆、表达以及重组蛋白多肽的有效分泌遗传欠稳定，载体受体系统欠完备各种基因工程受体的特性链霉菌抗生素的主要生产者，分子遗传相对操作简便，不产内毒素主要用于抗生素生产菌株的改良遗传不稳定，生长相对缓慢各种基因工程受体的特性酵母菌具有真核生物的特征，遗传背景清楚，生长迅速，培养简单，外源基因表达系统完善，遗传稳定适用于外源DNA的扩增、克隆以及真核生物基因的高效表达、基因文库的构建、真核生物基因表达调控的研究，是DNA重组实验和基因工程重要的真核性受体菌内源性蛋白产物种类繁多且含量高各种基因工程受体的特性哺乳动物细胞（中国仓鼠卵巢细胞CHO）与人的亲缘关系近，分子重组表达系统健全，具有合适的糖基化修饰系统适用于哺乳类动物和人的基因表达调控研究、基因药物的生产，是DNA重组实验和基因工程的主要哺乳动物受体细胞培养条件苛刻，生长缓慢带有人生长激素基因的转基因小鼠正常小鼠各种基因工程受体的特性植物细胞（拟南芥菜、烟叶）农作物的经济意义重大，转基因植物细胞易于分化，细胞培养简单且成本低廉，具有光合作用适用于高等植物基因表达调控的研究、基因药物的生产，农作物品质的改良遗传操作繁琐世界上第一种转基因作物:1983年培植出来含有荧光素酶的烟草。实验室常用的基因工程受体大肠杆菌用于接受质粒：C600、W3110、HB101、JM83、 JM109、BL21用于接受l-DNA：LE392、ED8654酵母菌哺乳动物细胞CHO毕赤酵母酿酒酵母4基因工程的操作过程C转化子的筛选和鉴定（检测）B重组DNA分子的转化和扩增（转化、扩增）ADNA的体外重组（酶切、连接）4基因工程的操作过程酶切连接转化扩增检测A同种内切酶生产的粘性末端的连接55GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGEcoRI5GCTTAAAATTCG55GCTTAA55AATTCG5退火GCTTAAAATTCG5GCTTAA5AATTCGGCTTAAAATTCG5GCTTAA5AATTCGT4-DNAligaseGAATTCCTTAAG55GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAG55GAATTCCTTAAGB重组DNA分子的转化