超声辅助提取白及多糖的研究.docx

摘?要：以白及粉末为原料，采用超声法提取白及多糖。通过单因素实验，研究表面活性剂种类及用量、提取时间、提取温度、液固比、超声功率等因素对白及多糖得率的影响，得到优化的工艺条件为：表面活性剂选择0.1g的聚乙二醇-400、超声提取温度30℃、超声提取时间80min、液固比值30mL/g、超声功率126W。

关键词：白及多糖；超声提取；单因素实验

0?引言

白及，又名连及草、冰球子、甘根等，为多年生草本植物，茎直立，总状花序顶生，花一般为紫色或淡红色。白及在我国民间作为中药使用已经有上千年的历史，根据《本草纲目》记载，白及的传统功效有收敛止血、清热利湿、消肿生肌、改善皮肤营养状况和防止皱纹，可用于治疗咳血、溃疡出血、胃出血等症。现代药理研究证实，除了上述作用以外，白及还具有抑制肿瘤血管生成、抗感染、防腐、促进凝血、保护胃黏膜、促进伤口愈合的功效。李时珍谓：“其根白色，连及而生。”故曰“白及”。“根”即白及块茎，白及在地下有粗厚的鸡头状块茎，含丰富的白及胶质，即白及多糖。白及多糖具有多种生物活性，是白及发挥药效的主要活性成分。

目前，白及多糖的提取方法可以分为传统提取法和新型提取法。传统提取法一般包括水煎煮法、酸液提取法、碱液提取法等。水煎煮法提取率低，且可能使白及中的一些活性成分受热分解；酸液提取可能导致多糖水解；碱液提取会使白及多糖变成棕色，因此传统提取方法不适宜提取白及多糖。新型提取方法包括超声提取、微波提取、酶提取、超临界流体萃取等。

本实验采用超声法提取白及多糖。利用超声波的机械效应、空化效应和热效应，破坏植物的细胞膜，使细胞内部的有效物质得到释放。该方法能耗小、提取时间短、提取得率高、使用溶剂少，并且不影响提取成分的化学性质。

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1?材料与方法

1.1??实验材料与试剂

实验材料与试剂如表1所示。

1.2??实验仪器与设备

实验仪器与设备如表2所示。

1.3?分析方法

1.3.1?显色方法和最大吸收波长的确定

以葡萄糖为标准溶液，一定浓度的白及多糖提取液为供试液，分别称取2mL标准溶液和供试液于25mL容量瓶中，一次加入6%的苯酚溶液1mL、98%的浓硫酸5mL，摇匀后，置沸水浴中保温30min，室温冷却10min。采用紫外可见分光光度计在400～650nm波长范围内进行波长扫描，测定其吸光度并确定最大吸收波长。

葡萄糖标准品溶液与白及多糖样品溶液波长扫描结果如图1所示，最大吸收波长λmax均在490～495nm范围内，本实验选择492nm为白及多糖样品溶液的实验检测波长。

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1.3.2?标准曲线的建立

分别精密量取0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL葡萄糖标准品溶液，置于25mL具塞比色试管中，补充去离子水至2mL，按1.3.1项操作，在492nm波长处测定白及多糖溶液吸光度，测得其标准曲线如图2所示。

标准曲线方程：y=14.404x-0.0179，线性浓度范围0.01～0.08?mg/mL，R2=0.9995，表明在该浓度范围内，白及多糖浓度C与吸光度A具有良好的线性关系。

1.3.3?白及多糖得率的计算

精密量取2.0mL白及多糖样品溶液后，按1.3.1项操作，在492nm波长处测定吸光度，利用回归方程计算样品溶液中白及多糖的浓度，白及多糖得率的计算方程：

式中?C——样品中多糖的浓度，mg/mL；

V——溶液体积，mL；

n——溶液稀释倍数；

M——白及用量，g。

1.4?超声提取单因素实验

精密称取0.5g的白及粉末于锥形瓶中，加入表面活性剂，再按一定的液固比加入去离子水，超声提取一段时间。抽滤后取0.33mL滤液定容于50mL容量瓶中。依次加入6%的苯酚溶液1mL、98%的浓硫酸5mL，摇匀后，置沸水浴中保温30min，室温冷却10min。采用紫外可见分光光度计在492nm波长处测定其吸光度。

在白及多糖单因素实验中，表面活性剂分别选用吐温20、吐温60、吐温80、司班60、司班80、SDS、聚乙二醇-400（用量均为1.0g）；筛选出最优表面活性剂后，表面活性剂用量分别选用0.02g、0.06g、0.10g、0.14g、0.18g、0.21g；超声提取时间分别取20min、30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min；液固比值分别选用10mL/g、20mL/g、30mL/g、40mL/g、50mL/g、60mL/g；超声功率控制在90W、108W、126W、144W、162W、180W；超声温度为20℃、30℃、40℃、50℃、60℃。

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2?结果与讨论

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