基因工程及其应用 (2).ppt

关于基因工程及其应用(2)第1页，共31页，星期日，2025年，2月5日基因工程基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向改造生物的遗传性状(分子水平）第2页，共31页，星期日，2025年，2月5日基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程实质（原理）结果基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平定向地改造生物的遗传性状，产生人类需要的基因产物剪切→拼接→导入→表达基因重组第3页，共31页，星期日，2025年，2月5日一种限制酶只能识别一种特定核苷酸序列；并在特定切点切割．一.限制性核酸内切酶——“分子手术刀”DNA重组技术的基本工具1、来源：2、种类：3、作用：主要是微生物4000种。4、结果：形成两种末端粘性末端平末端第4页，共31页，星期日，2025年，2月5日要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？要切两个切口，产生四个黏性末端。被同一种限制酶切断的几个来源不同的DNA是否具有相同的黏性末端？第5页，共31页，星期日，2025年，2月5日二.DNA连接酶——“分子缝合针”１、作用：把两条ＤＮＡ末端之间的缝隙“缝合”起来２、种类：E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶第6页，共31页，星期日，2025年，2月5日DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同和不同点？（1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的末端上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。（2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。第7页，共31页，星期日，2025年，2月5日三、基因的运输工具——运载体作用：将外源基因导入受体细胞种类：质粒（最常用的运载体，是染色体外能够自我复制的很小的环状DNA。）噬菌体动植物病毒①能够在宿主细胞中复制并稳定的保存。②具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接。③具有标记基因便于筛选。第8页，共31页，星期日，2025年，2月5日2.不属于质粒被选为基因运载体的理由是A、能复制（）B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状DNAD练习1、下列有关基因工程中限制内切酶的描述，错误的是A．一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列B．限制性内切酶的活性受温度的影响C．限制性内切酶能识别和切割RNAD．限制性内切酶可从原核生物中提取

C第9页，共31页，星期日，2025年，2月5日(一)提取目的基因从基因文库获取：鸟枪法３基因工程基本操作骤人工合成基因反转录法据已知的氨基酸序列合成DNA专一性强，目的基因中不含内含子第10页，共31页，星期日，2025年，2月5日（二）基因表达载体的构建1．目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在；可以遗传给下一代；使目的基因能够表达和发挥作用。2．基因表达载体的组成目的基因启动子：位于基因首端，RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动转录终止子：位于基因尾端，使转录在所需要的地方停下来标记基因：鉴别受体细胞中是否含有目的基因3．方法：4、工具第11页，共31页，星期日，2025年，2月5日3、?将目的基因导入受体细胞生物种类植物动物微生物常用方法受体细胞转化过程农杆菌转化法显微注射法Ca2+处理法体细胞受精卵原核细胞略 略 略第12页，共31页，星期日，2025年，2月5日目的基因的检测与鉴定外源基因受体细胞mRNADNA蛋白质方法性状方法方法方法检测：导入？检测：转录？检测：翻译？鉴定：表现？①检测是否插入目的基因，利用DNA分子杂交技术，目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的DNA杂交，看是否有杂交带。②检测是否转录出了mRNA，利用DNA分子杂交技术，目的基因DNA一条链（作探针）与受体细