血液透析器中双酚A(BPA)溶出量的测定方法气相色谱质谱联用法.docx

血液透析器中双酚A(BPA)溶出量的测定方法气相色谱质谱联用法

血液透析器中双酚A（BPA）溶出量的测定方法气相色谱-质谱联用法

原理

双酚A（BPA）经模拟使用提取后，用有机溶剂萃取浓缩，利用气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）进行分离和检测。在特定色谱条件下，双酚A在色谱柱上实现分离，通过质谱进行定性和定量分析。根据峰面积与标准曲线对比计算出样品中双酚A的溶出量。

试剂和材料

1.双酚A标准品：纯度≥99%，用于制备标准溶液。

2.正己烷：色谱纯，作为萃取溶剂。

3.乙酸乙酯：色谱纯，辅助溶解和萃取。

4.无水硫酸钠：分析纯，用于去除萃取液中的水分。

5.氯化钠：分析纯，用于盐析。

6.超纯水：电阻率≥18.2MΩ·cm，用于模拟使用浸提。

7.5%甲醇-水混合溶液：用于稀释和溶解样品。

仪器设备

1.气相色谱-质谱联用仪：具备电子轰击离子源（EI）。

2.分析天平：精度为0.1mg。

3.涡旋混合器：用于混合样品。

4.离心机：转速可达5000r/min。

5.氮吹仪：用于浓缩萃取液。

6.0.45μm有机相滤膜：用于过滤萃取液。

样品前处理

1.模拟使用提取

-将血液透析器按照说明书连接好，使用5%甲醇-水混合溶液作为模拟使用液体，以正常使用的流速（如500mL/min）循环灌注透析器30min，收集流出液。

-精确量取一定体积（如50mL）的流出液，置于100mL分液漏斗中。

2.萃取

-向分液漏斗中加入5g氯化钠，振摇使其溶解，进行盐析。

-加入10mL正己烷和5mL乙酸乙酯，振荡萃取10min，期间可间歇放气。

-将分液漏斗静置分层15min，使有机相和水相完全分离。

-将下层水相转移至另一分液漏斗，重复萃取一次，合并两次萃取的有机相。

3.除水和浓缩

-将合并的有机相通过装有无水硫酸钠的漏斗过滤，去除水分。

-将过滤后的有机相转移至离心管中，在40℃下用氮吹仪浓缩至近干。

-用1mL正己烷定容，涡旋混合均匀。

-将定容后的溶液通过0.45μm有机相滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中，待分析。

气相色谱-质谱分析条件

1.气相色谱条件

-色谱柱：DB-5MS毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm）。

-进样口温度：280℃。

-载气：高纯氮气，恒流模式，流速1.0mL/min。

-分流比：10:1。

-柱温程序：初始温度100℃，保持2min，以20℃/min升至280℃，保持10min。

2.质谱条件

-离子源：EI源，70eV。

-离子源温度：230℃。

-四极杆温度：150℃。

-扫描方式：选择离子监测（SIM）模式，监测离子m/z212、228，其中m/z212为定量离子。

-溶剂延迟时间：3min。

标准曲线的绘制

1.标准储备溶液的制备

准确称取10mg双酚A标准品，用正己烷溶解并定容至100mL，配制成100μg/mL的标准储备溶液。

2.系列标准工作溶液的制备

取一定体积的标准储备溶液，用正己烷稀释成浓度为0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL的系列标准工作溶液。

3.标准曲线绘制

分别吸取1μL系列标准工作溶液注入气相色谱-质谱联用仪，按上述分析条件进行分析，以峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程和相关系数。

样品测定

吸取1μL处理后的样品溶液注入气相色谱-质谱联用仪，按上述分析条件进行分析，根据峰面积，通过标准曲线计算样品中双酚A的含量。

结果计算

血液透析器中双酚A的溶出量（mg/L）可按下式计算：

\[C=\frac{C_1\timesV_1}{V}\]

式中：

C—血液透析器中双酚A的溶出量，mg/L；

C_1—由标准曲线查得的样品溶液中双酚A的浓度，μg/mL；

V_1—样品定容体积，mL；

V—模拟使用提取液的体积，mL。

精密度和回收率实验

1.精密度实验

取同一样品进行6次平行测定，计算双酚A测定结果的相对标准偏差（RSD），评估方法的精密度。

2.回收率实验

向已知双酚A含量的样品中加入一定量的双酚A标准品，按照上述方法进行处理和测定，计算回收率，评估方法的准确性。回收率计算公式为：

\[回收率(\%)=\frac{C_2-C_0}{C_{add}}\times100\%\]

式中：

C_2—加标样品测定的双酚A含量，mg/L；

C_0—样品中原本的双酚A含