新解读《GB_T 38421-2019毛皮 源性成分检测 实时荧光定性聚合酶链式反应(PCR)检测方法》最新解读.pptx
《GB/T38421-2019毛皮源性成分检测实时荧光定性
聚合酶链式反应(PCR)检测方法》最新解读
一、GB/T38421-2019标准概述
(一)标准出台背景与意义
随着毛皮产业的蓬勃发展,市场上毛皮制品的种类日益繁多,消费者对毛皮制品的质量和真实性愈发关注。然而,部分不良商家为追求利益,常以次充好、以假乱真,这不仅损害了消费者权益,也扰乱了市场秩序。在此背景下,GB/T38421-2019标准应运而生。该标准的出台,为毛皮源性成分检测提供了科学、准确的方法,有力地保障了消费者的合法权益,促进了毛皮行业的健康、有序发展。通过精确鉴定毛皮中的动物源性成分,能有效;
打击假冒伪劣产品,提升整个毛皮产业的信誉度和市场
竞争力。
(二)标准适用范围详解
本标准明确适用于八种常见天然毛皮,即水貂、兔、貉子、浣熊、马、牛、山羊和绵羊的源性成分定性检测。这八种毛皮在市场上广泛流通,涵盖了高、中、低端各类毛皮制品。无论是高端的水貂皮大衣,还是中低端的兔毛围巾、羊毛衫等,都可依据此标准进行源性成分检测。需要注意的是,对于其他种类的毛皮或非天然毛皮制品,该标准并不适用,在实际检测中需加以区分,避免误判。
二、实时荧光定性PCR技术原理剖析
(一)PCR技术基础介绍;
PCR技术,即聚合酶链式反应,是一种在体外快速扩增
特定DNA片段的技术。其原理是利用DNA双链复制的特性,通过高温变性使DNA双链解开,低温退火让引物与模板DNA结合,中温延伸由DNA聚合酶催化合成新的DNA链。经过多次循环,目标DNA片段得以大量扩增。在毛皮源性成分检测中,PCR技术是关键环节,它能够将毛皮中极微量的动物源性DNA进行扩增,以便后续检测。例如,即使毛皮样品中仅含有极少量的水貂DNA,通过PCR扩增后,也能使检测变得可行。
(二)实时荧光检测原理
实时荧光定性PCR技术在传统PCR基础上,加入了荧光基团。在PCR扩增过程中,荧光信号会随着产物的增加而不断积累,通过实时监测荧光信号的变化,就能;
对PCR进程进行监控。常见的荧光检测方法有DNA结
合染料法(???SYBRGreen)和水解探针法(如
TaqMan探针)。以SYBRGreen为例,它能特异性地与双链DNA的小沟结合,当游离状态时几乎无荧光信号,但结合双链DNA后,荧光信号会显著增强,且荧光强度与双链DNA分子数量成正比。通过监测荧光强度的变化,就可实时了解PCR产物的生成情况,从而判断毛皮中是否存在特定动物的源性成分。
三、检测流程全解析
(一)样本采集要点
1.采样部位选择:为确保检测结果的准确性,样本采集部位至关重要。对于整块毛皮,应选择具有代表性的部位,如毛皮的边缘、中间以及不同颜色或纹理变化处。;
对于毛皮制品,如大衣、帽子等,需在多个关键部位采
样,包括领口、袖口、下摆等易磨损且可能存在不同材质拼接的地方。以一件兔毛大衣为例,领口处与人接触频繁,可能因摩擦导致部分兔毛脱落或混入其他纤维,在此处采样能更全面地反映制品的真实情况。
2.采样量要求:根据标准,每个样本的采集量应不少于0.5g。足够的采样量能保证提取到足够的DNA进行后续检测,避免因DNA量过少而导致检测结果不准确。同时,在采样过程中要注意避免样本受到污染,使用干净、无菌的采样工具,如剪刀、镊子等。
3.样本保存与运输:采集后的样本应立即放入密封袋中,并标记清楚样本名称、采集时间、来源等信息。若不能及时进行检测,需将样本保存在-20℃以下的环境;
中,以防止DNA降解。在运输过程中,要采取适当的
冷链措施,确保样本温度始终符合要求,保证样本的完整性和DNA的质量。
(二)DNA提取方法与注意事项
1.常用提取方法介绍:目前,常用的DNA提取方法
有酚-氯仿抽提法、硅胶柱吸附法和磁珠法等。酚-氯
仿抽提法利用酚和氯仿对蛋白质和DNA的不同溶解性,通过多次抽提去除蛋白质等杂质,从而得到纯净的DNA。硅胶柱吸附法则是利用硅胶膜对DNA的特异性吸附作
用,在特定条件下使DNA吸附在硅胶柱上,经过洗涤去除杂质后,再将DNA洗脱下来。磁珠法是近年来发展较快的一种方法,它利用表面带有特殊官能团的磁珠与DNA结合,在外加磁场的作用下实现DNA的分离和;
纯化。在毛皮源性成分检测中,可根据实际情况选择合
适的提取方法,如样本量较少时,磁珠法可能更为便捷高效。
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