基因工程的工具酶 (2).ppt

第23页，共41页，星期日，2025年，2月5日六.Ⅱ型限制酶的基本特征6.3限制酶的切割特点识别序列不同，产生相同的粘性末端——同尾酶。一些限制性内切酶，它们虽然来源各异，识别的靶序列也各不相同，但都产生出相同的粘性末端，称之为同尾酶。由一对同尾酶分别产生出的粘性末端共价结合形成的位点，称之为杂种位点(hybridsite)。实例（百度文库——自学）：1.利用三引物PCR和同尾酶连接的策略实现多基因片段的重组。2.同尾酶技术在构建疟疾多价重组DNA疫苗中的应用。第24页，共41页，星期日，2025年，2月5日杂种位点（hybridsite）：由一对同尾酶分别产生的粘性末端共价结合形成的位点。一般不能被原来的任何一种同尾酶识别。BamHⅠGGATCCBclⅠTGATCACCTAGGACTAGT杂种位点TGATCCACTAGGSau3AⅠ第25页，共41页，星期日，2025年，2月5日第26页，共41页，星期日，2025年，2月5日六.Ⅱ型限制酶的基本特征6.3限制酶的切割特点识别简并序列简并序列是指序列中有的核苷酸位点可以是不同的核苷酸。例如：GTYRACY=C或TR=G或AHindⅡ实际上可以识别4个特定序列。第27页，共41页，星期日，2025年，2月5日六.Ⅱ型限制酶的基本特征6.3限制酶的切割特点识别序列相同，切割位点不同——同位酶。一些限制性内切酶，具有相同的识别位点，但切割部位不同，这类酶称为同位酶。SmaⅠCCCGGGCCCGGGXmaⅠ双酶切酶的价格第28页，共41页，星期日，2025年，2月5日一些来源不同的限制性内切酶，具有相同的识别位点和切割位点，这类酶称为同裂酶。如：HpaII/MspI。CCGGHpaII不能切割MspI能够切割C*CGGC*CGG表示甲基化6.3限制酶的切割特点六.Ⅱ型限制酶的基本特征第29页，共41页，星期日，2025年，2月5日关于基因工程的工具酶(2)第1页，共41页，星期日，2025年，2月5日第一节限制性核酸内切酶一.限制性内切酶的发现HamiltonO.Smith1968年，Smith等人首先从流感嗜血杆菌d株中分离出HindII和HindIII。1978年获得诺奖。此前（20世纪50年代），研究人员在噬菌体感染大肠杆菌试验中发现了寄主细胞的限制和修饰现象（R/M体系）。第2页，共41页，星期日，2025年，2月5日二.寄主的限制和修饰现象第3页，共41页，星期日，2025年，2月5日限制(Restriction)：指一定类型的细菌可以通过限制性内切酶的作用，破坏入侵的噬菌体DNA，导致噬菌体的寄主幅度受到限制。限制作用:实际就是限制性内切酶降解外源DNA，维护宿主遗传稳定的保护机制。第4页，共41页，星期日，2025年，2月5日修饰(modification)：指寄主本身的DNA，由于在合成后通过甲基化酶的作用得以甲基化，使DNA得以修饰,从而免遭自身限制性酶的破坏。修饰作用:宿主细胞通过甲基化作用达到识别自身遗传物质和外来遗传物质的目的。第5页，共41页，星期日，2025年，2月5日1）?菌株中有三个连锁的基因位点：hsdR、hsdM、hsdS。2）?hsdR编码限制性核酸内切酶---识别DNA分子特定位点，将双链DNA切断。（DNA分子转化细胞：受体细胞去掉hsdR基因位点）3）?hsdM编码产物是DNA甲基化酶---催化DNA分子特定位点的碱基甲基化反应。4）?hsdS表达产物的功能是---协助限制性核酸内切酶和甲基化酶，识别特殊的作用位点。三.限制和修饰作用的分子机制第6页，共41页，星期日，2025年，2月5日第7页，共41页，星期日，2025年，2月5日四.限制性核酸内切酶的概念和命名概念：一类能够识别双链D