猫弓形虫微滴式数字PCR检测方法.pdf

ICS

点击此处添加中国标准文献分类号

团体标准

T/CVMAXXXXX—XXXX

猫弓形虫微滴式数字PCR检测方法

MethodofDropletDigitalPCRforToxoplasmagondiiincat

（征意见

求稿）

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国兽医协会发布

T/CVMAXXXXXXXXX

—

猫弓形虫微滴式数字PCR检测方法

1范围

oii方试剂与耗材、仪器与设

本文件规定了猫的弓形虫(ToxoplasmaGnd)微滴式数字PCR检测法的

备、样品、操作步骤、结果分析。

本文件适用于猫粪便中弓形虫核酸检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

48实验室生物安全通用要求

GB199

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫

NY/T41兽医诊断5样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本

和义适用于文件。

下列术语定

3.1微滴数

式字

微滴式数字PCR（

drol

petdigitlP

aCR）利用微滴化技术将一份反应体系分成数万个纳升级的微

滴进行定量PCR检测，本质上是将传统PCR的一次检测变成数万次检测，提高了核酸序列检测的灵敏

度和精准度。

4试验条件

4.1生物安全要求

所有样品、培养物和废弃物的处置应符合GB19489的规定。

4.2防污染措施

防止污染措施应符合GB/T27401的规定。

5试剂与耗材

1

T/CVMAXXXXXXXXX

—

5.1核酸提取试剂

宜选取商品化的粪便DNA提取试剂盒。

5.2微滴式数字PCR扩增试剂与耗材

照

宜按不同的微滴式数字PCR平台的说明书选取推荐的滴式

微数字PCR扩增试剂与耗材。

5.3引物和探针

上游引物（F）：5’-TCCCCTCTGCTGGCGAAAAGT-3’

下游引物（R）：5’-AGCGTTCGTGGTCAACTATCGATTG-3’

TGCAG-BHQ1-3’

ATTTGGTGTATC

探针（P）：5’-FAM-TCTGTGCAC

6仪器与设备

生物安全柜、PCR扩增仪、数字PCR微滴发生器、数字PCR微滴分析仪、纯水仪、核酸定量仪、涡

旋震荡仪、冰箱、移液器。

7样品