越桔组织培养技术规程 DB2301 T 212-2024.pdf

ICS65.020.20

CCSB61

2301

黑龙江省哈尔滨市地方标准

DB2301/T212—2024

越桔组织培养技术规程

2024-12-30发布2025-02-05实施

哈尔滨市市场监督管理局  发布

DB2301/T212—2024

越桔组织培养技术规程

1范围

本文件规定了越桔（Vacciniumvitis-idaeaL.）组织培养育苗技术的外植体的采集与消毒、培养

基制备、培养程序、炼苗与移栽、出圃和生产档案等。

本文件适用于越桔的组织培养育苗。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则

LY/T1882—2010林木组织培养育苗技术规程

NY/T1276农药安全使用规范总则

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4外植体的采集与消毒

4.1外植体采集

4月～7月份的晴天剪取叶片表面无露水、生长健壮且无病虫害的当年生嫩枝，去掉叶片并留1mm～

2mm叶柄作为外植体。

4.2外植体的消毒

4.2.1将剪成带1个芽的外植体茎段用流水冲洗10min～20min。

4.2.2用75%酒精对双手及手腕消毒，将外植体置于已灭菌的烧杯中，先用75%酒精浸泡30s，无菌

水清洗3次，每次30s。

4.2.3再用10%次氯酸钠溶液灭菌10min，无菌水清洗3次，每次30s。

4.2.4用无菌滤纸吸干外植体表面的水分备用。

4.2.5药剂应符合GB/T8321和NY/T1276的规定。

5培养基制备

5.1培养基配比

5.1.1基础培养基

基础培养基为WPM，基础培养基配制方法按LY/T1882中4.2.1规定执行。

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DB2301/T212—2024

5.1.2初代培养基

初代培养基按WPM1L+ZT2.0mg～4.0mg＋蔗糖30g＋琼脂7g进行配置，pH值5.2～5.4。

5.1.3继代培养基

继代培养基按WPM1L+IBA0.1mg～0.2mg+ZT2.0mg～4.0mg＋蔗糖30g＋琼脂7g进行配置，

pH值5.2～5.4。

5.1.4生根培养基

生根培养基按WPM1L+IBA3.0mg～4.0mg＋NAA0.4mg+蔗糖60g＋琼脂14g进行配置，pH值

5.2～5.4。

5.2培养基灭菌

培养基在压力0.105MPa、温度121℃的条件下灭菌20min。灭菌物应不超过灭菌锅容积的3/4。

5.3培养基保存

灭菌后的培养基放入接种室，应避免阳光直射，在18℃～22℃条件下存放不宜超过7d。

6培养程序

6.1初代培养

6.1.1接种

在超净工作台上将已消毒的外植体茎段垂直插入初代培养基，每个培养瓶接种3个～5个茎段，均

匀分布，接种后将培养瓶瓶口在酒精灯火焰上灼烧1s～2s，迅速盖好瓶盖，放入培养室培养。

6.1.2培养条件

白天25℃±2℃，夜间不低于15℃。黑暗培养7d后，转入光照培养。相对空气湿度70%～80%，

光照强度为2000Lux～3000Lux，光照时间为12h/d～16h/d。待嫩芽长出后，进行继代培养。

6.2继代培养

6.2.1接种

将初代培养后长出的嫩茎剪成1cm左右的茎段，插入新鲜