植物组织培养园艺.ppt

*培养基灭菌方法-------湿热灭菌法培养基湿热灭菌最少时间液体容积（ml）121℃所需时间（min）20---50157520250---500251000301500---200035---40第31页，共51页，星期日，2025年，2月5日*培养基高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）操作P20灭菌后培养基的存放：锅内加水放入消毒桶装入培养基盖好锅盖接通电源加热排尽锅内冷空气达到灭菌温度时开始计时并保持足够长的时间继续加热切断电源压力表指针归零时打开锅盖取出培养基并存放好第32页，共51页，星期日，2025年，2月5日*高压蒸汽灭菌锅安全使用注意事项：①灭菌前外层锅内要加入足够的水,灭菌完成后要将锅内的水排放干净。②在灭菌过程中及灭菌后，压力表压力指针归零之前,不能打开锅盖,以免发生危险。③注意日常维护和检查,及时发现问题,及时修理，保证使用安全可靠。第33页，共51页，星期日，2025年，2月5日*使用高压蒸汽灭菌锅进行物品灭菌时的注意事项：①消毒锅内放置的物品要有一定的缝隙，便于高温蒸汽上下回流，达到良好灭菌效果。②锅内冷空气必须完全排尽，否则压力表的指针虽然达到了规定的压力，但由于锅内冷空气的存在，并不能达到相应的温度，因而影响灭菌效果。③进行培养基灭菌时，锅内达到规定的灭菌温度后，在严格保持灭菌温度的同时，还要严格保持灭菌时间。时间过长会破坏培养基内一些化学成分的有效性，时间过短则达不到灭菌效果。第34页，共51页，星期日，2025年，2月5日*2.3.2.3无菌操作室内的灭菌方法熏蒸灭菌法射线灭菌法2.3.2.4外植体的表面灭菌P29化学消毒剂灭菌法抗生素抑菌法第35页，共51页，星期日，2025年，2月5日*1.外植体灭菌的常用杀菌剂良好的外植体灭菌效果的含义：外植体灭菌后无菌率高，同时植物细胞不会受损伤或只是轻微受损伤而能保持正常生长。第36页，共51页，星期日，2025年，2月5日*2.外植体表面灭菌外植体表面灭菌操作前的准备工作：①无菌水、漂洗瓶、切割用器皿（玻璃培养皿或不锈钢切割盘）和金属器具均经过高温高压灭菌并整齐摆放在超净工作台上。②灭菌剂配制好并整齐摆放在超净工作台上。第37页，共51页，星期日，2025年，2月5日关于植物组织培养园艺第1页，共51页，星期日，2025年，2月5日*2.1.1.2无菌操作室⒈功能⒉组成缓冲室（间）：接种室（间）：⒊无菌操作室的消毒⒋主要设备超净工作台金属器械消毒器第2页，共51页，星期日，2025年，2月5日*2.1.1.3培养室功能主要设备环境条件第3页，共51页，星期日，2025年，2月5日*2.1.1.4温室功能第4页，共51页，星期日，2025年，2月5日*2.1.2组培实验室的布局2.1.2.1布局基本要求便于隔离，便于操作，便于灭菌和便于观察。2.1.2.2基本布局规律根据实验操作程序排列实验室；接种室和培养室设在与外界环境隔离性好的区域；灭菌室与接种室相邻；其他实验室的布局可根据条件，以方便使用为宜。第5页，共51页，星期日，2025年，2月5日*培养室准备室灭菌室储藏室接种室缓冲室植物组织培养实验室布局示意图第6页，共51页，星期日，2025年，2月5日*2.1.2.3设计组培实验室时的注意事项为了减少污染，实验室最好设一走廊且走廊上方最好安装紫外灯；培养室最好设在南面，设大玻璃窗，以双层玻璃窗为最好。如果培养室是设在房屋的边侧，其东边或西边的墙上也可设置大玻璃窗；培养室房间及门要小，而且密闭性要好，最好装移门；无菌操作室要小，要设缓冲间，也最好装移门，且门要稍大一些。第7页，共51页，星期日，2025年，2月5日*2.1.3组培实验室的基本设备2.1.3.1器皿和器械类⒈玻璃器皿⒉器械镊子