基因工程和蛋白质工程公开课.ppt

（1）从基因文库中获取目的基因①基因文库将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。基因文库基因组文库部分基因文库（cDNA文库）第28页，共61页，星期日，2025年，2月5日②基因文库的构建方法（1）从基因文库中获取目的基因a.直接分离—“鸟枪法”（原核细胞）优点：操作简便缺点：工作量大，具一定盲目性b.人工合成—反转录（真核细胞）取出DNA用限制酶切断DNA第29页，共61页，星期日，2025年，2月5日通过对受体菌的培养而储存基因③基因文库的储存（1）从基因文库中获取目的基因第30页，共61页，星期日，2025年，2月5日（2）利用PCR技术扩增目的基因①PCR全称为多聚酶链式反应，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。第31页，共61页，星期日，2025年，2月5日③条件：___________、___________、__________________、________________。②原理：__________DNA复制脱氧核苷酸DNA引物热稳定DNA聚合酶模板DNA（2）利用PCR技术扩增目的基因①PCR全称为多聚酶链式反应，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。④过程：第32页，共61页，星期日，2025年，2月5日模板DNA95℃第33页，共61页，星期日，2025年，2月5日PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点50℃引物1引物2DNA引物第34页，共61页，星期日，2025年，2月5日PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点引物1引物2DNA引物72℃Taq酶Taq酶第35页，共61页，星期日，2025年，2月5日PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的特点72℃第1轮结束第2轮开始第36页，共61页，星期日，2025年，2月5日④过程：a.DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________b.退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链第37页，共61页，星期日，2025年，2月5日蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测目的基因化学合成（3）化学方法人工合成目的基因DNA合成仪第38页，共61页，星期日，2025年，2月5日从基因文库中获取利用PCR技术扩增利用化学方法人工合成（一）目的基因的获取三、基因工程的基本操作程序第39页，共61页，星期日，2025年，2月5日用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。用_____________切断目的基因，使其产生_________________。将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量___________，形成了一个重组DNA分子（重组质粒）限制酶黏性末端同一种限制酶相同的黏性末端DNA连接酶（二）基因表达载体的构建（核心步骤）三、基因工程的基本步骤第40页，共61页，星期日，2025年，2月5日重组载体组成：三、基因工程的基本步骤a.目的基因b.启动子c.终止子d.标记基因（二）基因表达载体的构建（核心步骤）第41页，共61页，星期日，2025年，2月5日将目的基因导入受体细胞将受体细胞进行扩增（三）将目的基因导入受体细胞三、基因工程的基本步骤1.植物细胞：2.动物细胞：3.微生物细胞：（受精卵、卵细胞、体细胞）（受精卵或早期胚胎干细胞）农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法显微注射法感受态细胞法第42页，共61页，星期日，2025年，2月5日1.将目的基因导入植物细胞农杆菌转化法（双子叶植物和裸子植物）Ti质粒目的基因构建表达载体导入植物细胞插入植物细胞染色DNA表达新性状转入农杆菌第43页，共61页，星期日，2025年，2月5日2.将目的基因导入动物细胞方法：显微注射法（将基因表达载体提纯，用显微仪注射到受精卵中）思考：为什么要用受精卵而不用体细胞？第44页，共61页，星期日，2025年，