DB34_T3653-2020_番鸭胚垂直传播病毒(RT-)PCR检测技术规范_安徽省.docx
ICS65.020.30
DB34
B41
安徽省地方标准
DB34/T3653—2020
番鸭胚垂直传播病毒(RT-)PCR检测
技术规范
Technicalregulationfordetectionofverticaltransmissionvirusesby(RT-)PCRfrom
MuscovyDuckembryos
安徽省市场监督管理局发布
DB34/T3653—2020
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准由安庆永强农业科技股份有限公司提出。
本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：安庆永强农业科技股份有限公司、福建省农业科学院畜牧兽医研究所、利辛县绿
墅养殖专业合作社、安徽黄氏番鸭食品有限公司、阜阳市农业科学院。
本标准主要起草人：刘荣昌、刘友生、蒋晓璐、汪敏、赵巧珍、傅秋玲、黄瑜、黄永强、万春和、
郭大伟、傅光华、施少华、程龙飞。
I
DB34/T3653—2020
番鸭胚垂直传播病毒(RT-)PCR检测技术规范
1
范围
本标准规定了番鸭胚垂直传播病毒（RT-）PCR检测技术的术语与定义、仪器与设备、试剂和材料、
操作步骤和结果判定。
本标准适用于番鸭胚垂直传播病毒的（RT-）PCR检测。
2
规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682
分析实验室用水规格和试验方法
GB19489实验室生物安全通用要求
GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫
《禽流感防治技术规范》（农医发[2007]12号）
番鸭胚垂直传播病毒VerticaltransmissionvirusinMuscovyduckembryo
可以通过番鸭胚垂直传播的病毒统称，包括鸭甲肝病毒1型（DuckHepatitisVirustype1,
DHAV-1）、鸭甲肝病毒3型（DuckHepatitisVirustype3,DHAV-3）、番鸭细小病毒（MuscovyDuck
Parvovirus,MDPV）、鹅细小病毒（GooseParvovirus,GPV）、番鸭呼肠孤病毒（MuscovyDuckReovirus,
MDRV）、新型番鸭呼肠孤病毒（NovelMuscovyDuckReovirus,N-MDRV）、H9亚型禽流感病毒（H9subtype
ofAvianInfluenzaVirus,H9-AIV）。
1
DB34/T3653—2020
5试剂和材料
5.110％的十二烷基磺酸钠。
5.2RNA提取试剂Trizol。
5.3三氯甲烷。
5.4焦炭酸二乙酯（DEPC）处理水，实验用水应符合GB/T6682的要求。
5.5磷酸盐缓冲液（PBS），见附录A.1。
5.6蛋白酶K（10mg/mL），见附录A.2。
5.7异丙醇。
5.8Tris?饱和酚。
5.9酚-三氯甲烷-异戊醇（25:24:1）。
5.1075％乙醇，见附录A.3。
5.11乙酸钠（3mol/L，pH5.4）。
5.12无水乙醇。
5.13核糖核酸酶（20mg/mL）。
5.14TAE电泳缓冲液，见附录A.4。
5.1510×加样缓冲液，见附录A.5。
5.16对照样品：DHAV-1、DHAV-3、MDPV、GPV、MDRV、N-MDRV和H9-AIV阳性对照样品均为以上病毒
接种的番鸭胚尿囊液；阴性对照样品：未接种的正常番鸭胚尿囊液；以灭菌PBS为空白对照。
5.17引物设计与合成：分别根据DHAV基因组3’端核苷酸序列、GPV和MDPV基因组NS基因、MDRV的
δC蛋白基因片段保守区设计特异性引物；H9亚型AIVHA基因特异引物均参照农业部颁布的《禽流感
防治技术规范》（农医发[2007]12号）进行合成，引物序列及预期片段大小说明见表1：
病毒名称
DHAV
F:5’-AGGCCCAGAAGCATTCAAACA-3’
R:5’-TGGGTGTTTTACGTGTACTC-3’
F:5’-CAATGGGCTTTTACCAATATGC-3’
R:5’-ATTTTTCCCTCCTCCCACCA-3’
F:5’-GAATCGTGGTCTAGCGAC-3’
DHAV-1为258bp，DHAV-3为321bp
以下所有实验室操作均按照GB19489和GB/T27401中给出的方