生物方法 技术 试剂DNA提取原理和方法.pdf
DNA提取方法简介
DNA提取的几种方法
基因组DNA的提取
CTAB法
SDS法
其它
DNA提取的几种方法
非基因组DNA的提取
质粒DNA的提取
•碱裂解法
•煮沸法
线粒体、叶绿体DNA的提取
•差速离心结合SDS裂解法
基因组DNA－CTAB法
CTAB法原理（植物DNA提取经典方法）
CTAB（hexadecyltrimethylammoniumbromide，十六烷基三甲基
溴化铵），是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合
物。
具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，在这种条
件下，蛋白质和中性多聚糖仍留在溶液里
该复合物在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，通过有机溶剂
抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离
出来。
注：CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此在将其加入冰冷的
植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。
基因组DNA－CTAB法
CTAB提取缓冲液的经典配方
Tris-HClEDTA
组份NaClCTABβ-巯基乙醇
（pH8.0）（pH8.0）
0.1%（V/V）
终浓度100mM20mM1.4M2%(W/V)
使用前加入
Tris-HCl（pH8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；
EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；
NaCl提供一个高盐环境，使DNP（脱氧核糖核蛋白）。CTAB溶解细胞膜，
并结合核酸，使核酸便于分离；
β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除
基因组DNA－CTAB法
CTAB提取缓冲液的改进配方
Tris-HClEDTA
组份NaClCTABPVP40β-巯基乙醇
（pH8.0）（pH8.0）
2%（V/V）
终浓度100mM20mM1.4M3%(W/V)5%(W/V)
使用前加入
PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶
的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能
和多糖结合，有效去除多糖。
PVP（聚乙烯吡咯烷酮）
PVP按其平均分子量大小分为四级，习惯上常以
K值表示，不同的K值分别代表相应的PVP平均分
子量范围。K值实际上是与PVP水溶液的相对粘度
有关的特征值，而粘度又是与高聚物分子量有关的
物理量，因此可以用K值来表征PVP的平均分子量。
通常K值越大，其粘度越大，粘接性越强。
在研磨过程中加入PVP，其中的CO-N=基有很强的
结合多酚的能力，从源头上减少了酚类被氧化的机
会。
同时向抽提液中加入还原剂β-巯基乙醇，后者能打
断多酚氧化酶中的二硫键，使多酚不易被氧化，随
后经抽提而去除。
基因组DNA－CTAB法
CTAB法流程图
植物材料裂