小叶黄杨的化学成分及心肌细胞保护作用研究.docx

背景介绍

小叶黄杨作为心脑宁胶囊药物组成之一，有行气活血，祛湿通络之功效。对小叶黄杨的研究主要集中在植物学、农学以及生物碱成分的提取和临床应用方面，而在生物碱成分的富集处理过程中，大量其他成分被忽略。因此开展小叶黄杨干燥叶化学成分分离工作可以进一步补充小叶黄杨临床应用的药效物质基础。心肌梗死、动脉粥样硬化、缺血/再灌注等心脑血管疾病仍然是危害世界各国人民健康和生命的最严重疾病，心血管疾病的发病机制也复杂多样。心肌细胞是一种高度分化的细胞，心肌细胞的凋亡会导致心功能下降，最终导致心衰。因此，寻找能够减少心肌细胞凋亡的新药是目前治疗心血管疾病的一种直接有效的方法。本文对小叶黄杨干燥叶中的化学成分进行研究，并对提取各部位和分离得到的化合物进行体外心肌细胞保护作用测试。

文章亮点

从小叶黄杨干燥叶中共分离得到14个化合物，化合物2、5、6为首次从该植物中分离得到；

体外实验表明乙酸乙酯部位和化合物14（松脂素）可显著改善H2O2诱导的心肌细胞损伤，几种多羟基的芳香类成分也显示出一定的心肌细胞保护作用；

研究结果有利于进一步揭示作为心脑宁胶囊药物组成之一的小叶黄杨能够减少心肌细胞凋亡进而治疗心血管疾病。

内容介绍

1??实验部分

?1.1?提取与分离

50.0kg小叶黄杨（B.sinicavar.parvifolia?M.Cheng）干燥叶用95%乙醇加热回流提取3次（70℃，每次回流2h），3次提取液合并减压浓缩得到4.8kg乙醇浸膏。乙醇浸膏加适量水充分混悬后，依次用乙酸乙酯和正丁醇分别萃取3?~??5次，减压浓缩得到乙酸乙酯部位（EA部位，1.0kg）和正丁醇部位（878.0g）。

?1.2??心肌细胞保护作用测试

H9c2细胞常规培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，、37oC恒温培养箱、5%CO2条件下培养。在10cm培养皿中培养的细胞生长至对数期后，用PBS缓冲溶液冲洗细胞2次，再在培养皿中加入1mL0.25%胰酶，转移至37oC、5%CO2培养箱消化3min。取出细胞在显微镜下观察，当细胞失去贴壁形态变成圆形后，弃去胰酶后，加入3mL含10%胎牛血清的DMEM完全培养基终止消化并制成细胞混悬液。

2??结果与讨论

2.1???体外心肌细胞保护作用结果

小叶黄杨提取萃取部位对H2O2诱导的H9c2细胞存活率的影响：与正常对照组相比，H2O2诱导的H9c2细胞损伤模型组（CH）细胞存活率降低至42.5%（p0.0001）；与模型组相比，乙酸乙酯部位（BS-EA）样品干预，H9c2细胞存活率显著提高到84.1%（p0.001），可显著改善H2O2诱导的心肌细胞损伤（图1）。

图1??提取物（50μg/mL）对H2O2诱导H9c2细胞损伤的影响（平均值±标准差，n=3,***P0.05vs.CH,****P0.0001vs.C）

Fig.1??Effectofextracts(50μg/mL)on?H2O2-inducedcardiomyocyteinjuryinH9c2cells(mean±standarddeviation,n=3,***P0.05vs.CH,****P0.0001vs.C)

分离得到的单体化合物对H2O2诱导的H9c2细胞存活率的影响：与正常对照组相比，模型组（CH）H9c2细胞存活率显著降低至42.5%（p?0.01）。化合物14（松脂素）干预，H9c2细胞存活率显著提高到77.7%（p?0.01）；化合物1、2、4~7、9、10的干预下，均可将H9c2细胞存活率提高，存活率分别为49.2%、44.3%、51.7%、44.6%、57.0%、52.3%、55.5%和60.9%；这些单体化合物显现较好的心肌细胞保护作用。化合物3、8、11?~?13使细胞存活率显著降低（图2）。

图2??化合物1～14（50μmol/L）对H2O2诱导H9c2细胞损伤的影响（平均值±标准差，n=3,****P0.0001vs.CH）

Fig.2???Effectofcompounds1～14(50μmol/L)on?H2O2-inducedcardiomyocyteinjuryinH9c2cells(mean±standarddeviation,n=3,****P0.0001vs.CH)

3??结论

本文对小叶黄杨的化学成分进行研究，从小叶黄杨干燥叶95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位中分离鉴定了14个化合物，包括6个芳香类、3个三萜类、2个黄酮类、1个香豆素类、1个木脂素类和1个其他类化合物。其中化合物2、5和6为