荧光显微镜使用和显微摄影.ppt

(三)电源系统高压电源电源系统透镜电源附属电源第30页，共56页，星期日，2025年，2月5日第31页，共56页，星期日，2025年，2月5日第32页，共56页，星期日，2025年，2月5日光源中间象物镜样品聚光镜目镜电子枪聚光镜样品物镜中间象投影镜观察屏照相底板虚象第33页，共56页，星期日，2025年，2月5日三、透射电镜的样品制作（一）超薄切片法主要步骤：取材固定洗涤脱水浸透包埋聚合修块切片装网电子染色上镜观察1、取材1mm3（或mm2）活体取材，低温，4oC。刀片锋利，动作轻巧迅速。第34页，共56页，星期日，2025年，2月5日2、固定电镜常用固定剂：戊二醛、锇酸固定方法：戊二醛—锇酸双固定第35页，共56页，星期日，2025年，2月5日前固定2.5%戊二醛溶液，4oC，1—4小时。洗涤0.2M磷酸缓冲液，pH7.4，5—6次，每次10分钟。后固定1%的锇酸溶液，4oC，1小时。洗涤0.2M磷酸缓冲液，pH7.4，3—4次，每次10分钟。第36页，共56页，星期日，2025年，2月5日c、注意事项温度在低温下进行，4oC。时间与固定液的浓度、种类有关。不可随意更改。固定液的pH接近组织的pH。固定液的浓度浓度过低，会发生组织肿胀、抽提；浓度过高，组织收缩或遭破坏。固定液的渗透压应该接近组织液的渗透压。第37页，共56页，星期日，2025年，2月5日3、脱水一定浓度的酒精或丙酮系列30%50%70%80%90%95%100%（2-3次），每步5—15分钟。注意：a、70%脱水剂以上各步都在低温（4oC）下进行。b、样品只有在70%脱水剂，4oC可以存放过夜。c、脱水要彻底。第38页，共56页，星期日，2025年，2月5日4、浸透包埋剂成分：树脂单体（环氧树脂618#、Epon812等）、固化剂、增塑剂及加速剂。注意事项：浸透要充分；包埋剂配制时要混匀各种成分；用具要干燥，防止包埋剂吸潮。浸透过程：无水丙酮?无水丙酮+1/2包埋剂（4小时）纯包埋剂（过夜）。第39页，共56页，星期日，2025年，2月5日5、包埋与聚合包埋模包埋，加温聚合。注意：防止产生气泡；包埋后要干燥，防止吸潮。第40页，共56页，星期日，2025年，2月5日第1页，共56页，星期日，2025年，2月5日2、荧光显微镜的装置A、可以提供特定波长的光源装置，使被检物体得到理想的激发发出强的荧光。B、可以吸收或反射短波光的一系列滤光片。第2页，共56页，星期日，2025年，2月5日第3页，共56页，星期日，2025年，2月5日第4页，共56页，星期日，2025年，2月5日八、倒置显微镜第5页，共56页，星期日，2025年，2月5日九、显微摄影1、按不同类型显微镜的调节方式，对拍摄部位初步对焦。2、视场光阑内切。3、选择光路（包括显微镜的与取景器旁的）4、安装胶卷5、设置自动曝光装置6、彩色照像要调色温，调电压或用滤光片第6页，共56页，星期日，2025年，2月5日7、屈光度调节8、按曝光按钮9、取出胶卷第7页，共56页，星期日，2025年，2月5日第8页，共56页，星期日，2025年，2月5日生物电子显微镜技术第一节透射电子显微镜技术一、显微镜的分辨率与放大倍数分辨率：d=0.61λ/η·sinα第9页，共56页，星期日，2025年，2月5日电子的波长：λ=h/mvh—普朗常数,6.62×10-27尔格/秒m—电子质量,9.1×10-28克v—电子运动速度根据能量守恒定理：1/2mv2=eUe—电子电量,4.8×10-10静电单位U—电压第1