荧光显微镜的基本使用方法.ppt

关于荧光显微镜的基本使用方法实验目的1.了解荧光显微镜的基本原理；2.掌握荧光显微镜的基本结构和使用注意事项；第2页,共22页，2024年2月25日，星期天自发性荧光物质神经细胞和心肌细胞等内的脂褐素呈棕黄色荧光。肝贮脂细胞和视网膜色素上皮细胞内的维生素A呈绿色荧光。某些神经内分泌细胞和神经纤维内的单胺类物质（儿茶酚胺、5－羟色胺、组胺等）在甲醛作用下呈不同颜色的荧光。组织内含有的奎宁、四环素等药物也呈现一定的荧光。嗜中性粒细胞中脱氢酶辅酶呈现一定的荧光。第3页,共22页，2024年2月25日，星期天第4页,共22页，2024年2月25日，星期天优点：检出能力高对细胞的刺激小能进行多重染色用途：物体构造的观察荧光的有无、色调比较进行物质判别发荧光量的测定对物质定性、定量分析荧光显微镜的优点和用途第5页,共22页，2024年2月25日，星期天实验原理光源激发滤色镜分色镜发射滤色镜（阻挡滤片）第6页,共22页，2024年2月25日，星期天实验原理荧光显微镜的光路及主要部件光源激发光挡片激发滤色镜分色镜发射滤色镜第7页,共22页，2024年2月25日，星期天第8页,共22页，2024年2月25日，星期天Microscopeswithanupright-styleframearecapableofproducingfluorescenceilluminationeitherthroughepiscopicordiascopicopticalpathways,althoughthelatterisrarelyusedtoday.Epi-illuminatorsusuallyconsistofamercuryorxenonlamphousecoupledtoaverticalilluminatorthatispositionedabovethemainframeinaseparateassembly.Themicroscopenosepieceandtransmittedlightcomponents(diascopicilluminator,condenser,fielddiaphragm,filters,etc.)arebuiltintothemainframe,whilefluorescencecomponentsarehousedintheverticalilluminator.Theseilluminatorsoftencontainarevolvingorslidingturretthathousesfourtosixcubesthatcontainamixtureofinterferencefiltersincludingabarrierfilter,dichroicmirror,andanexcitationfilter.Asillustratedabove,lightemittedfromthelamppositionedintheepiscopiclamphousepassesthroughacollectorlensandthenthefieldandaperturediaphragmsbeforeenteringthefirstinterferencefilterinthecubeset,theemissionfilter.Thislightisthendirectedthroughtheobjectiveandontothespecimenbyaspecialdichroicmirrorthatreflectscertainwavelengthswhilepassingothers.Secondaryfluorescence,emittedbyfluorophoresresidinginthespecimen,travelsbackthroughtheobjectiveandthedichroicmirrorbeforepassingthroughabarrierfilterandintothemicroscopeeyepiecesorcamerasystem.第9页,共22页，2024年2月25日，星期天激发光源高压汞灯