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#流程大放送#SILAC定量蛋白质组学

Agonyr

SILAC（StableIsotopeLabelingwithAminoacidsinCellculture）

技术是另一种常用的蛋白组定量技术，使用同位素标记的必需氨基酸

取代细胞培养基中相应氨基酸，细胞经5-6个倍增周期后，稳定同位素

标记的氨基酸完全掺入到细胞新合成的蛋白质中替代了原有氨基酸，

然后可对细胞中的蛋白质进行质谱鉴定和定量分析。

技术优势——目前比较蛋白质组学最先进方法

（1）高效性：SILAC是体内标记技术，标记效率可高达100%；

（2）定量精确：线性范围广，降低由于样品不同而造成的实验内

差异；

（3）高通量、灵敏度高：可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质，且

检可测测到纳克级水平；

（4）相容性：可以对多种在DMEM或RPMI1640培养基中能够培养

的细胞或细菌中表达的蛋白进行标记；

（5）灵活性：在缺乏L-赖氨酸和L-精氨酸的培养基中添加同位素标

记的这两种氨基酸，操作方便。

细胞经过传代培养7天后，同一肽段被“重”型肽段取代

实验流程：

1.稳定同位素标记与标记效率检测

2.对照组和实验组细胞扩大培养

3.细胞组分总蛋白的提取和酶解

4.液质联用串联质谱分析