DB51T 2457-2018 斑点叉尾鮰柱形病诊断技术规程 .docx
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ICS65.150B52
DB51
四川省地方标准DB51/T2457—2018
斑点叉尾鮰柱形病诊断技术规程
2018-04-18发布2018-05-01实施
四川省质量技术监督局发布
I
DB51/T2457—2018
目次
前言 II
1范围 1
2规范性引用文件 1
3术语和定义 1
4试剂和材料 1
5主要设备和器械 2
6临床检查 2
7样品采集 2
8细菌分离与纯化 2
9细菌鉴定 2
10结果判定 4
11综合判定 5
附录A（规范性附录）试剂配方 6
附录B（资料性附录）柱状黄杆菌16SrRNA基因参考性序列（1477bp） 8
II
DB51/T2457—2018
前言
本标准依据GB/T1.1-2009给出的规定进行编写。本标准中附录A为规范性附录、附录B为资料性附录。本标准由四川省农业厅提出并归口。
本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准起草单位：四川农业大学。
本标准起草人：黄小丽、耿毅、陈德芳、欧阳萍、段靖、冯杨。
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DB51/T2457—2018
斑点叉尾鮰柱形病诊断技术规程
1范围
本标准规定了由柱状黄杆菌（Flavobacteriumcolumnare）引起的斑点叉尾鮰（IetalurusPunetaus）柱形病的临床症状、病原鉴定方法与结果判定。
本标准适用于由柱状黄杆菌感染导致的斑点叉尾鮰柱形病的诊断。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂
GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法GB/T18652致病性嗜水气单胞菌检验方法
GB/T28630.4白斑综合征（WSD）诊断规程第4部分：组织病理学诊断法SC/T7014水生动物检疫实验技术规范
SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范
SC/T7201.2鱼类细菌病检疫技术规程第2部分：柱状嗜纤维菌烂鳃病诊断方法SC/T7213鮰嗜麦芽寡养单胞菌检测方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于此文件。3.1
斑点叉尾鮰柱形病
指由柱状黄杆菌（Flavobacteriumcolumnare）感染引起斑点叉尾鮰（IetalurusPunetaus）发病或死亡的一种细菌性疾病。
4试剂和材料
4.1试剂、染色液与培养基
检验中所需试剂、染色液与培养基的配制按照GB/T4789.28、GB/T18652、SC/T7014规定执行，Taq酶、dNTPs、10×PCR缓冲液（无Mg2+）、DNA分子量标准参照物与核酸提取试剂盒选用专业试剂公司提供的商品化试剂；微生物生化鉴定管可代替相应鉴定培养基或鉴定试剂，上述未提及的见附录A。
4.2水
应符合GB/T6682中一级水的规格。
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DB51/T2457—20184.3引物
16SrRNA基因DNA序列扩增引物，P-F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’，P-R：5’-GGTTACCTTGTT
ACGACTT-3’，保存引物的使用浓度为20μmol/L，-20℃保存。
5主要设备和器械
超净工作台、高压灭菌锅、恒温培养箱、高速冷冻离心机、水平电泳系统、凝胶成像系统、普通光学显微镜、PCR扩增仪、电子天平、微量移液器、普通冰箱、解剖盘、剪刀、镊子、手术刀、培养皿、铂耳丝、酒精灯等。
6临床检查
6.1临床症状
病鱼体色发黑，反应迟钝，靠边、游动迟缓，摄食减少或停止摄食。
6.2体表检查
病鱼可出现不同程度烂尾、烂鳍、烂鳃、皮肤灶性腐烂或体表溃疡灶，部分可在唇部、头部等身体多个部位出现黄色增生物。
6.3剖检
病鱼内脏器官病变表现常不明显，偶见脾脏肿大发黑。
7样品采集
样品采集按SC/T7103执行。
8细菌分离与纯化
在无菌的环境中，从病鱼溃疡灶边缘、烂鳍烂尾处直接分离接种，常规划线接种至Shieh培养基。或将病变鳍条或鳃丝剪下，直接放置在Shieh培养基上接种。28℃培养24h-48h，从中挑取黄色、边缘不整齐、假根状、中央