DB23_T2536—2019_橡胶草组织培养育苗技术规程_黑龙江省.docx
ICS65.020
B61
DB23
黑龙江省地方标准
DB23/T2536—2019
橡胶草组织培养育苗技术规程
黑龙江省市场监督管理局
DB23/T2536—2019
前
言
本标准依据GB/T1.1-2009的编写规则起草。
本标准由黑龙江省科学院提出。
本标准起草单位：黑龙江省科学院自然与生态研究所。
本标准主要起草人：陈菲、曾祥俊、曲彦婷、李黎、沈光、韩辉、熊燕、张悦、唐焕伟、杨轶华、
李虹、曲线、孙波。
I
DB23/TXXXX—XXXX
橡胶草组织培养育苗技术规程
1
范围
本标准规定了橡胶草（Taraxacumkok-saghyzRodin.）组织培养育苗技术的环境与设备消毒、培
养基制备、外植体诱导、继代增殖、生根培养、炼苗移栽、生产档案。
本标准适用于橡胶草组织培养育苗。
2
规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6001育苗技术规程
LY/T1882
NY/T2306
林木组织培养育苗技术规程
花卉种苗组培快繁技术规程
3
环境与设备消毒
接种室消毒按NY/T2306-2013中8.6进行。
超净工作台消毒
3.2
超净工作台消毒按NY/T2306-2013中8.5、8.6进行。
1
DB23/TXXXX—XXXX
4.2.1培养基配方
培养基配制成分如下：
a)诱导培养基：MS+6-BA2.0mg/L+2,4-D1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉5.5g/L，pH值5.8；
b)继代增殖培养基：MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉5.5g/L，pH值5.8；
c)生根培养基：1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉5.5g/L，pH值5.8。
4.2.2
培养基配制方法
培养基配制方法按LY/T1882-2010中4.2.1进行。
培养基灭菌
4.3
培养基灭菌按LY/T1882-2010中4.2.2进行。
4.4培养基保存
培养基保存按LY/T1882-2010中4.2.3进行。
5外植体诱导
5.1
外植体的选择
从生长健壮无病虫害的母株上选取5cm～6cm长的幼嫩叶片作为外植体。
5.2外植体消毒处理
将外植体置于烧杯中，用洗洁精溶液洗涤，然后用自来水冲2h～4h，在超净工作台上用75%酒精浸
泡消毒30s，倒掉酒精，用无菌水冲洗3次～4次；再用0.1%氯化汞溶液浸泡6min，期间不断摇动，倒净
氯化汞溶液，用无菌水冲洗6次～7次，放在接种盘内用无菌滤纸吸干表面水分。
将消毒处理后的外植体切成长1cm～2cm，接种在诱导培养基上进行初代诱导培养。
操作时，先将培养瓶的瓶盖取下，再将培养瓶的瓶口倾斜靠近酒精灯火焰，用镊子将外植体接种到
诱导培养基上，将培养瓶瓶口在酒精灯外焰上旋转灼烧后封好瓶口。接种完成后，在培养瓶上标注接种
物名称和日期，培养20d～25d。
外植体经诱导培养生成愈伤组织后，分化产生不定芽，将不定芽不断转接到增殖培养基中进行培养，
20d～25d为1代，进行多次继代。
将继代后的组培苗接种在生根培养基中诱导生根，培养25d～30d，当组培苗基部长出健壮的不定
根3条~5条，根长为2cm～3cm时，即可出瓶移栽。
培养室白天的温度控制在25±2℃，夜间不低于15℃，相对空气湿度控制在70%～80%，光照强度为
2000Lux～3000Lux，光照时间为12h/d～14h/d。
2
DB23/TXXXX—XXXX
9炼苗移栽
9.1炼苗
将培养瓶转移到过渡培养室中，自然光照下炼苗2d～3d，然后打开瓶盖，再炼苗2d～3d，温度控制
在22～25℃。
9.2移栽
从培养瓶中取出生根的小苗，用清水洗净根部的培养基，清洗培养基时动作要轻，避免伤根，将洗
净的生根苗移栽至装有珍珠岩的穴盘中，每穴1株，移栽后要把苗周围的基质压实，然后浇透水。
9.3苗期管理
将移栽后的组培苗放到温室中，保证幼苗水分供需平衡，育苗水分管理按照GB/T6001进行。移栽
初期应进行遮阴，5d～7d后发现幼苗有生长趋势，可以逐渐降低湿度，加强光照。温室环境应保持清
洁，温度控制在22℃～25℃，空气湿度保持在70%～80%，光照强度为2000Lux～2500Lux。
10生产档案
建立橡胶草组织培养育苗技术档案，包括环境和设备消毒、培养基制备、外植体诱导、继代增殖、
生根培养、炼苗移栽等。
3