DB51T 1077-2010 饲料中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定 高效液相色谱法　　.docx

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备案号：28167-2010DB51

四川省地方标准

DB51/T1077—2010

饲料中黄曲霉毒素B?、B?、G?、G?的测定高效液相色谱法

DeterminationofaflatoxinsB?、B?、G?、G?infeedsHighperformanceliquidchromatography

2010-06-01发布2010-07-01实施

四川省质量技术监督局发布

I

DB51/T1077-2010

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3原理 1

4试剂和溶液 1

5仪器与设备 1

6试样制备 2

7分析步骤 2

8结果计算 2

9精密度 3

附录A(资料性附录) 4

Ⅱ

DB51/T1077-2010

前言

本标准的附录A为资料性附录。

本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准。

本标准由四川省饲料工作总站负责起草。

本标准起草人：柏凡、张静、李云、冯娅、甄阳光、赵立军。

1

DB51/T1077-2010

饲料中黄曲霉毒素B?、B?、G?、G?的测定高效液相色谱法

1范围

本标准规定了测饲料中黄曲霉毒素B?、B?、G?、G?的含量的高效液相色谱法(HPLC)。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及饲料原料的测定。

本标准中黄曲霉毒素B?、B?、G?、G?的检出限分别为2.0μg/kg、0.8μg/kg、2.5μg/kg、1.5μg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样

GB/T20195动物饲料试样的制备

3原理

试样经乙腈-水提取，离心、过滤后，取滤液经过免疫亲和柱净化，浓缩，用高效液相色谱仪-柱后衍生-荧光检测器检测，外标法计算黄曲霉毒素B?、B?、G?、G?含量。

4试剂和溶液

除特殊说明外，所有试剂均为分析纯，色谱用水符合GB/T6682一级用水的规定。

4.1甲醇：分析纯、色谱纯。

4.2氯化钠。

4.3氯化钾。

4.4磷酸氢二钠。

4.5磷酸二氢钾。

4.6甲醇-水(70+30)提取液：量取甲醇700mL,加水300mL,混匀。

4.7磷酸盐缓冲液(PBS):称取8.0g氯化钠、1.44g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾，溶于1000mL水，用盐酸或氢氧化钠溶液调pH7.4。

4.8黄曲霉毒素混合标准溶液：Bi、G?为2.0μg/mL,B?、G?为0.5μg/mL。

4.8.1标准贮备液：精密量取1.0mL黄曲霉毒素混合标准溶液，用乙腈溶解、定容至10mL,此贮备液黄曲霉毒素B?、B?、G?、G?浓度分别为200μg/L、50μg/L、200μg/L、50μg/L,置于冰箱中2℃~8℃保存，有效期6个月。

4.8.2标准工作溶液：分别准确移取标准贮备液，用流动相配制成标准工作溶液，黄曲霉毒素B?、G?的浓度为1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L,黄曲霉毒素B?、G?的浓度为0.25μg/L、0.50μg/L、1.25μg/L、2.50μg/L、5.00μg/L、12.50μg/L,置于冰箱中2℃~8℃保存，有效期1个月。

注意：

注1:凡接触黄曲霉毒素的容器，需浸入4%次氯酸钠(NaOC1)溶液，放置半天后清洗备用。注2:为了安全，分析人员操作时须带上医用乳胶手套，在通风橱内操作。

4.9黄曲霉毒素免疫亲和柱。

5仪器与设备

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DB51/T1077-2010

5.1分析天平：感量0.1mg。

5.2振荡器。

5.3离心机：转速为5000r/min以上