DB45T 2029-2019 甘蔗白条病菌PCR 检测技术规程.pdf

ICS65.020.01

B16

DB45

广西壮族自治区地方标准

DB45/T2029—2019

甘蔗白条病菌PCR检测技术规程

DetectingtechniqueregulationsforpathogenofXanthomonasalbilineans

(Ashby)DowsonbasedonPCR

2019-12-05发布2019-12-30实施

广西壮族自治区市场监督管理局发布

DB45/T2029—2019

前言

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本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。

本标准由广西壮族自治区糖业办公室提出并监督实施。

本标准由广西糖业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：广西壮族自治区农业科学院甘蔗研究所、广西甘蔗遗传改良重点实验室。

本标准主要起草人员：韦金菊、刘昔辉、覃振强、张小秋、张荣华、桂意云、魏春燕、宋修鹏、李

杨瑞、周珊、黄东亮、颜梅新、刘璐。

I

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DB45/T20292019

甘蔗白条病菌PCR检测技术规程

1范围

本标准规定了甘蔗白条病菌（Xanthomonasalbilineans(Ashby)Dowson）的PCR检测的原理、试

剂、主要仪器与设备、样品的采集、保存和运输、检测方法和结果描述及判定。

本标准适用于甘蔗白条病菌[Xanthomonasalbilineans(Ashby)Dowson]的快速检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

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GB/T66822008分析实验室用水规格和试验方法

3原理

利用甘蔗白条病病原白条黄单胞菌16-23rRNA的ITS基因设计的特异性强的引物XaAlb2-f3和

XaAlb2-r3，以病原菌的DNA为模板，PCR扩增合成目的片段，从而快速、灵敏、高效地对甘蔗白条病菌

Xanthomonasalbilineans

（(Ashby)Dowson）进行检测。

4试剂

4.1所用试剂均为分析纯试剂，实验室用水符合GB/T6682—2008中二级水指标，其中涉及PCR的用

水应符合一级水指标。

4.2液氮。

4.3植物基因组DNA提取试剂盒。

4.4Goldenview核酸染料。

×μ

4.52EasyTaqPCR反应预混液：市售产品。浓度为10mmol/L，其中含有0.05U/LTaqDNA

Polymerase、0.4MmdNTPMixture、4mMMg2+、2×PCRBuffer。

×

4.61TE缓冲液。

4.71500bpDNA分子质量标准物。

4.8琼脂糖，电泳级。

4.9检测引物序列：

——上游引物XaAlb2-f3：5-CACACACACAATACAGCATTGCGG-3；’