狂犬病的实验室检测与诊断技术幻灯片.ppt

狂犬病的实验室检测与诊断技术 ;1. 临床诊断与实验室诊断 ;2. 人狂犬病的生存期内诊断 ; 人狂犬病的生存期内诊断 ;3. 动物和人狂犬病的死后诊断;二　狂犬病诊断实验室的安全措施;生物安全级别＆对工作人员的要求 (Biological Safety Level, BSL ) (Protection, P )BSL-1：实验人员在实验程序方面受过特殊训练，由受过微生物学或相关科学一般训练的科学工作者监督实验。BSL-2：实验人员均接受过病源处理方面的特殊培训，并由有资格的科学工作者指导。BSL-3：实验人员应在处理致病性的和可能使人致死的病源方面受过专业训练，并由对该病源工作有经验的、有资格的科学工作者监督。BSL-4：实验室成员应在处理特别危险的传染源方面受过特殊和全面的训练，应了解标准和特殊操作中一级和二级遏制的作用、遏制设备、实验室设计性能。实验由在有关病源方面受过训练、并有工作经验的、有资格的科学工作者监督。;2. 对安全操作的建议;三 狂犬病毒抗原的检测;1) 标本取自个体的生命期 ;2) 标本取自死亡后的个体 ;标本取自死亡后的个体（人）; 2. 标本的运送 ; 3. 标本的获取;;;;动物脑组织的获取;;2) 唾液腺的获取;4. 标本的快速收集技术;;1) 材料 ;2) 方法 ;5. 荧光抗体实验 Fluorescent Antibody Test (FAT);;;狂犬病毒抗原;荧光抗体实验检测狂犬病毒抗原;荧光抗体实验检测狂犬病毒抗原;用抗狂犬病毒核蛋白的单克隆抗体制备荧光结合物;6. 快速狂犬病酶免疫诊断法 Rapid Rabies Enzyme Immunodetection (RREID;6. 快速狂犬病酶免疫诊断法 ;;7. 各种抗原检测方法的比较：; 四 狂犬病毒的分离和滴度测定 ;小鼠颅内接种分离狂犬病毒法;细胞培养分离技术Cell-culture Isolation Techniques (CIT);;狂犬病毒抗原的检测与诊断;;胶体金免疫层析法检测狂犬病毒抗原;3. 组织培养狂犬病毒快速滴定法;;2) 结果;狂犬病毒抗原检测方法的比较;;狂犬病毒抗原的检测与诊断;五 灭活疫苗效价的测定;改良抗体结合试验(ABT)在体外快速检测灭活狂犬病疫苗效力;改良抗体结合试验(ABT)的应用;2. 简化的NIH小鼠试验法;稀释度计算公式;稀释度计算举例：;五　狂犬病毒核酸的检测 ;;1. 基???扩增(PCR)及检测;PCR产物的琼脂糖凝胶电流电泳图谱;;;RV PCR的目标基因;2. 以基因扩增对狂犬病毒进行分型和来源鉴定; 狂犬病的潜伏期到底能有多长？PCR技术应用于狂犬病毒来源鉴定的一个精彩例证： ;3. 狂犬病毒G基因的序列测定和系统树进化分析;我所与法国巴斯德研究所一项合作研究的实例： ;(2) 病毒RNA的提取及RT-PCR;;聚类分析(进化系统树的构建);2) 结果和讨论：;五、 狂犬病毒抗体的检测;小鼠中和试验（Mouse　neutralizing test, MNT） ;小鼠中和试验;2. 快速荧光灶抑制试验 （RFFIT） Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test;快速荧光灶抑制试验;;病毒最适攻击量的确定： 24小时能使80%细胞被感染的最高稀释度。;MNT和RFFIT检测RV中和抗体含量的变异范围： MNT ： 67% ~149% RFFIT： 68% ~146%;MNT和RFFIT检测2种抗RV血清参考品的结果;微量RFFIT方法的建立;A. 实验方法;2) 血清病毒中和反应：;3) 加入细胞：; ; B. 结果观察; C. 计算实例:;用MNT和RFFIT测定2种抗RV中和血清参考品的结果;RFFIT的特点：;3. 酶免疫吸附法（ELISA）：;各种检测狂犬病毒抗体的ELISA法的抗原抗体比较 ;酶免疫吸附法;ELISA的特点：;; EIA与MNA检测狂犬病毒抗体结果比较免疫用疫苗 例数 MNA EIA EIA 阳性数 阳性数 阳检率 维尔博苗 74 74 74 100%aG浓缩苗 67 67 62 92.5%CTN精制苗