分子生物学实验室技术应用知识要点.doc

分子生物学实验室技术应用知识要点

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1.请首先在试卷的标封处填写您的姓名，身份证号和地址名称。

2.请仔细阅读各种题目，在规定的位置填写您的答案。

一、选择题

1.基因表达调控过程中，哪种RNA参与转录后修饰？

答案：miRNA（小干扰RNA）和rRNA（核糖体RNA）。

解题思路：在基因表达调控过程中，miRNA和rRNA可以通过剪接、修饰等过程影响mRNA的稳定性、转运和翻译效率，从而调控基因表达。

2.在PCR技术中，引物设计时应考虑哪些因素？

答案：引物长度、Tm值、序列特异性、引物间错配、GC含量等。

解题思路：引物设计要考虑PCR的特异性、效率及扩增产物大小，避免非特异性扩增。Tm值接近目标DNA的Tm值有助于提高PCR的效率。

3.DNA序列比对的主要目的是什么？

答案：找出同源性区域，分析基因进化、识别转录因子结合位点等。

解题思路：DNA序列比对是分子生物学研究中常用的方法，通过比较不同DNA序列，可以发觉基因的保守区域，了解基因功能、进化关系等信息。

4.Southern印迹分析主要用于检测什么？

答案：特定的DNA片段。

解题思路：Southern印迹分析是检测特定DNA片段的技术，通过电泳分离DNA片段，再将其转移至膜上，利用探针杂交，从而检测目标DNA片段。

5.重组DNA技术的基本步骤包括哪些？

答案：提取目的DNA、制备载体、构建重组DNA、转化宿主细胞、筛选和鉴定阳性克隆。

解题思路：重组DNA技术是通过体外重组目的基因和载体，构建基因表达系统。步骤包括目的基因提取、载体制备、构建重组DNA、转化宿主细胞和筛选鉴定阳性克隆。

6.逆转录PCR技术中，逆转录酶的作用是什么？

答案：以RNA为模板，合成cDNA。

解题思路：逆转录PCR技术是利用逆转录酶将RNA转录成cDNA，以便后续PCR扩增，检测目的基因。

7.基因克隆的目的是什么？

答案：研究基因功能、进行分子育种、制备重组蛋白等。

解题思路：基因克隆是实现基因功能研究、分子育种和制备重组蛋白的重要手段。

8.Northern印迹分析用于检测哪种分子？

答案：mRNA。

解题思路：Northern印迹分析是检测mRNA的技术，通过电泳分离mRNA，再将其转移至膜上，利用探针杂交，从而检测目标mRNA。

二、填空题

1.DNA聚合酶I在DNA复制过程中的主要功能是切除引物和修复DNA损伤。

2.基因敲除技术中，常用到的工具酶是同源重组酶（如CreloxP系统）。

3.实时荧光定量PCR技术中，常用的荧光染料是SYBRGreenI。

4.DNA甲基化是表观遗传学中的一个重要调控机制，它通过改变DNA的甲基化水平来调控基因表达。

5.Southern印迹分析中，将DNA转移到硝酸纤维素膜上通常采用毛细管转移法。

6.在蛋白质纯化过程中，常用的分离技术有凝胶过滤色谱和离子交换色谱。

7.质粒作为基因克隆的载体，其主要优点是具有多个克隆位点、易于复制和筛选标记。

8.重组蛋白表达系统中，常用到诱导剂有IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）和Tet（四环素）。

答案及解题思路：

1.解题思路：DNA聚合酶I在DNA复制过程中负责移除RNA引物，填补引物留下的空隙，以及修复可能的DNA损伤。

2.解题思路：基因敲除技术通常使用同源重组酶来精确地删除或替换基因。

3.解题思路：实时荧光定量PCR技术中，SYBRGreenI是一种常用的荧光染料，可以与双链DNA结合并发出荧光。

4.解题思路：DNA甲基化通过在DNA碱基上添加甲基基团，改变DNA的结构，从而影响基因的表达。

5.解题思路：Southern印迹分析中，毛细管转移法是一种将DNA从凝胶转移到硝酸纤维素膜上的常用方法。

6.解题思路：凝胶过滤色谱和离子交换色谱是蛋白质纯化中常用的两种分离技术，分别基于分子大小和电荷差异进行分离。

7.解题思路：质粒作为载体，因其具有多个克隆位点、易于复制和选择标记等优点，在基因克隆中广泛使用。

8.解题思路：IPTG和Tet是两种常用的诱导剂，用于控制重组蛋白的表达水平。IPTG通常用于启动大肠杆菌中的乳糖操纵子，而Tet则用于四环素依赖性表达系统。

三、判断题

1.PCR技术可以在没有模板DNA的情况下扩增目的基因。（×）