第5次课生化天然产物化学实验技术.ppt

第三讲 天然药物活性成分的提取与分离 提取 基础 分离 白桦酸酯 合成（化学、生物转化） 一、提取 1 文献 2 系统预试→化学成分种类 3 提取溶剂（根据目的成分选择） 水（鞣质、糖类、蛋白质） 冷水、热水 HCl、NaOH →成盐溶出 醇 （乙醇、甲醇） 95% → alkaloids 60-70% →皂苷、黄酮苷 40-50% → 强心苷 丙酮、乙酸乙酯、氯仿等（苷元） 4 提取方法（根据提取目的、要求和条件选择） 冷浸法（3-4次） 渗漉法：热不稳定物、可按极性梯度提取 煎煮法（3-4次） 回流提取（3-4次） 连续回流提取法 超临界流体萃取 超声波提取 微波提取 二、分离 1 分类 粗分（部位分离） 细分（部位分组） 单离（单体成分分离） 2 方法 色谱法（平面色谱、柱色谱、逆流色谱） 结晶 平面色谱 薄层色谱TLC (Thin Layer Chromatograph) 功能：定性分析（预试、指导分离) 对照—标准品 种类：硅胶G, GF254 、RP-18 、聚酰胺 显色：通用—碘、H2SO4/EtOH 专属—alkaloids, flavonoids 实例：紫杉醇和三尖杉宁碱分离中的跟踪检测 展开剂：二氯甲烷－正己烷－甲醇－三乙胺（3.5:4.5:0.5:1） 6、TLC技术的发展 HPTLC 巨形板TLC 不锈钢板 (60*60 cm) ；厚度：5 mm 上样量 ＞10 g 带浓缩带TLC 二维TLC 多次展开（同方向） 双向展开 加压薄层色谱OPLC（Overpressure Layer Chromatography） 又称 Overpressure TLC (OPTLC) 1、简介 1979年，HPTLC 吸收HPLC的某些特点： 平面、细颗粒、蒸气相、恒流速 2、特点 与传统PTLC比较 效率 50 mg~0.5 g ；1 h 3、制备型OPLC 联机检测、分段收集 4、应用 氨基酸，多肽，胡萝卜素，生物碱等 离心薄层层析（CTLC） centrifugal Thin Layer Chromatogram 1、概述 CTLC是在TLC和柱色谱基础上发展起来，利用旋转离心力，连续洗脱。 2、仪器 倾斜盘、流动相中央进入 梯度、UV检测、N2保护 固定相活化、反复使用 3、特点 （1）分离快速（30min） （2）流动相少 （3）进样量大 （4）可梯度洗脱 （5）直接检测，接收灵活 （6）色谱板可反复使用 （7）操作简单，占地小，移动方便 柱 色 谱Column Chromatogrphy 常压柱色谱 (0.1~50 g) （Ordinary Column Chromatogr.） 吸附柱色谱 分配柱色谱 植物有效 柱色谱 离子交换柱色谱 成分分离 凝胶过滤柱色谱 主要手段 聚酰胺柱色谱 大孔吸附树脂 一、吸附性色谱 Al2O3 or Silica gel 生物碱 水溶性 Al2O3 甾体 脂溶性 Silica gel 挥发油 脂溶性 1 装柱 Al2O3：吸附剂 : 样品 (20~50 : 1) →(20~100 :1) Silica：吸附剂 : 样品 (30~100 : 1) →(300~400 :1)