微生物鉴定中常用生理生化试验.pdf

微生物常规生理生化试验

摘要利用大肠杆菌（Escherichiacoli）、枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）、铜绿假单

胞菌（Pseudomonasaeruginosa）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）进行淀

粉和油脂实验，证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力的不同，从而说明不同微生

物有着不同的酶系统，掌握进行微生物大分子水解实验的原理和方法；使用大肠杆菌

（Escherichiacoli）和普通变形杆菌（Proteusvulgaris）进行葡萄糖和乳糖发酵试验，了

解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法；

利用大肠杆菌（Escherichiacoli）、产气肠杆菌（Enterobacteraerogenes）进行吲哚试验

和甲基红试验，了解两个实验的反应原理以及在肠道细菌鉴定中的意义和方法。

关键词生理生化大分子试验糖发酵试验吲哚试验甲基红试验

前言微生物代谢与其他生物代谢有着许多相似之处，也有不同之处。微生物代谢重要特

征之一，就是代谢类型的多样性，因此使得微生物在自然界的物质循环中起着重要的作用，

同时也为人类开发利用微生物资源提供更多的机会与途径。人们在微生物的分类鉴定工作

中，常利用其生理生化反应作用作为重要依据。

微生物对大分子淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物

质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化

合物，使其能被运输至细胞内，这些过程均可以通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。

糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多

数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。

不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶，因而发酵糖(醇)的能力各不相同，其产生的代谢产

物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。

IMViC试验是吲哚（indoltest）、甲基红（methylredtest）、伏-普（Voges-Prokarer

test）和柠檬酸盐（ciratetest）4个试验的缩写，这4个试验主要是用来快速鉴别大肠

杆菌和产气肠杆菌，多用于水的细菌检查。

1、材料与方法

1.1材料

菌种

1.1.1

枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）、大肠杆菌（Escherichiacoli）、产气肠杆菌

（Enterobacteraerogenes）、普通变形杆菌（Proteusvulgaris）、铜绿假单胞菌

（Pseudomonasaeruginosa）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）。

1.1.2试剂

固体油脂培养基3个、固体淀粉培养基2个、葡萄糖发酵培养基试管和乳糖培养基试管

各3支（内装有倒置的德汉氏小管）、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、革兰氏染

色用卢戈氏碘染液、甲基红指示剂、乙醚和吲哚试剂等

1.1.3仪器和其他用品

无菌平皿、无菌试管、接种环、试管架等

1.2方法

1.2.1淀粉水解试验

(1)将淀粉培养基溶化后，冷至50℃左右，以无菌操作制成平板。

(2)将制成的平板用记号笔划成四部分，将、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌

和铜绿假单胞菌分别在不同部位无菌操作画“.”接种，并在4部分上写上菌名。

(3)将上述已接种的平板倒置于37℃温室中培养48小时。

(4)将已培养48小时的平皿取出，打开皿盖，滴加少量卢戈氏碘液于平板上，轻轻旋转平

皿，使碘液均匀铺满整个平板。

1.2.2油脂水解实验

(1)将溶化的油脂培养基冷至50℃左右时，充分振荡，使油脂均匀分布，用无菌操作倒入

平皿中，待凝。

(2)将制成的平板用记号笔划成四部分，分别以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽

孢杆菌和大肠杆菌作为试验菌，均用无菌操作画“.”接种，并在4部分上写上菌名。

(3)将接种的平板倒置于37℃温室中培养48小时。

(4)取出平板，观察平板底层长菌的地方，如出现红色斑点，说明脂肪被水解，为阳性反

应。

1.2.3葡萄糖发酵试验和乳糖发酵试验

（1）用记号笔在各试管外壁上分别标明发酵培