试验九微生物的生理生化特性.ppt

四、水样的采集和保存 用于细菌检验之水样较化学分析所用的尤应谨慎采取。所取水样必须要保证其代表性。并在收集和保存时不得有所污染，瓶中水样不应完全装满，以便于检验前能彻底摇匀。采集水样的容器，可用清洁硬质玻璃瓶。容器必须经高压灭菌，保证无菌。并需保证水样在运送、保存过程中不受污染。 如要从河湖或井水中取水，可用特制的采样器。取样前应对玻璃瓶先作灭菌处理。采集时将采样器浸入水中，使采样瓶口位于水面下10-15cm深处。然后拉开瓶塞，使水进入瓶中。水样采集后，应将水样瓶中水样倒入无菌储样玻璃瓶中，或将水样瓶取出，立即用无菌棉塞塞好瓶口，以备检查。 采取自来水水样时，须先冲洗龙头，再用酒精棉烧灼灭菌，然后放水5-10min，接着将瓶移上取水。 采取含有余氯的水样时，应在水样瓶未检验前接500mL水样加入1.5％硫代硫酸钠溶液2mL，以消除氯的作用。 水样采集和分析的间隔时间应尽可能缩短。水样采取与检验相隔时间应在4h内。 取样时要将取样日期、温度、水的来源、环境状况、水的用途等注明。 五、实验方法及步骤 原理：发酵法是根据大肠菌群能发酵某些糖类而产酸产气等特性来进行检验的。 步骤：(1)水样稀释 (2)初发酵试验: 以无菌操作的方法，用无菌移液管吸取1mL1:100和l:10的稀释水样以及1mL原水样，分别注入装有10mL乳糖蛋白胨培养基的发酵管中，另取10mL原水样，注入装有5mL三倍浓乳糖蛋白胨培养基的发酵管中，置37℃恒温箱中培养18-24h后观察结果。 情况分析：①如无气体和酸产生，则为阴性反应，表示无大肠菌群存在；②如有气体和酸产生，或虽无气体产生，但有酸形成，则为阳性反应，表示此水可能为粪便污染，需作进一步的检验；③如有气体形成，但没有产酸，溶液也不浑浊，则操作技术上有问题，须重作检验。 (4)复发酵试验：用无菌接种环挑取上述涂片镜检显示革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌落的另一部分接种于已灭菌的装有10mL普通浓度乳糖蛋白胨培养基的小发酵管(内有倒管)中，每管可接种分离自同一初发酵管或发酵瓶的最典型的菌落1-3个，然后置于37℃恒温箱中培养18-24h，有产酸产气者(不论倒管内气体多少皆作为产气论)，即证实大肠菌群存在。 菌落计数及报告方法：作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用。而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀。则可将此平皿计数后乘 2 以代表全皿菌落数。 六、思考题 1、测定大肠菌群数说明什么问题？为什么要用 大肠菌群作检验指标? 2、测定细菌总数说明些什么? 3、为什么乳糖蛋白胨培养基用0.7kg/cm2 灭菌，而不用1kg/cm2 20miｎ？ 4、作了细菌检验，为什么自来水厂还要经常进行余氯的测定? 5、根据我国饮用水水质标准，讨论这次检验的结果？ 谢 谢 * 实验目的 实验用具 培养基及染色试剂 水样的采集和保存 实验方法及步骤 思考题 实验九 微生物的生理生化特性 一、实验目的 在水处理工程中，水源水要经过处理后才能供给用户。饮用水要求清澈、无色、无臭，更重要的是没有病原菌。因此，自来水在出厂以前要作水质的物理化学分析和细菌检验，本实验结合给水净化工程中的细菌检验，作细菌总数和大肠菌群的测定。通过大肠菌群的测定，了解大肠杆菌的生理生化特性。 大肠菌群数系指每升水样中所含有的大肠菌群的数目。大肠菌数一般包括大肠埃希氏杆菌、产气杆菌、枸椽酸盐杆菌和副大肠杆菌。本实验的发酵试验采用含有乳糖的培养基，故测定结果不包括副大肠杆菌。 细菌总数是指1mL水样在营养琼脂培养基中，于37°C经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数(实际上所表示的是腐生细菌的数目。腐生细菌在营养琼脂培养基上所形成的菌落呈白色细点状)。 我国现行生活饮用水卫生标准GB5749—85规定：细菌总数是指1mL水中不得超过100个，大肠菌群1L水中不得超过3个。 1．水样瓶； 2．吸管、试管、锥形瓶等；3．稀释瓶； 4．培养皿(平皿)； 5．发酵管和发酵瓶； 6．接种环； 7．细菌滤器； 8．滤膜； 9．高压蒸汽灭菌器； l0．恒温箱(培养箱)； 11．电冰箱； 12．显微镜； 13．镜油(香柏油)、二甲苯、擦镜纸等； 14．普通放大镜；