【毕业论文】实验十微生物的生理生化反应(二).ppt

实验十 微生物的生理生化反应（二） vp试验 甲基红试验 淀粉水解试验 一、目的要求 1.了解细菌的一般生化反应； 2.了解细菌的生化鉴定方法其原理。 二、基本原理 1．伏一普（Voges-proskauer）二氏反应，即V·P反应 2．甲基红试验（M·R试验） 3．淀粉水解试验 1．伏一普（Voges-proskauer）二氏反应，即V·P反应 ?某些菌生长于葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，而丙酮酸又可缩合、脱羧而转化成乙酰甲基甲醇，如加入强碱液，即与空气中的氧起作用产生二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的含胍基成分作用生成红色化合物，称阳性反应，没有红色化合物产生则称阴性反应。 2．甲基红试验（M·R试验） 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能产生大量的酸，使pH降低至4～5，它先产生丙酮酸，丙酮酸再被分解成甲酸、乙酸、乳酸等。酸的产生可由加入甲基红指示剂的变色而指示（有效pH范围为4.2～6.3）。细菌分解葡萄糖产酸，则培养液由原来的桔黄色，变为红色，即为甲基红反应。 3．淀粉水解试验 某些细菌可以产生能水解培养基中淀粉的淀粉酶（胞外酶），使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，再被细菌吸收利用。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。 三、材料? 菌种：大肠杆菌；枯草杆菌；自己分离的大肠杆菌。 葡萄糖蛋白胨水培养基；淀粉培养基； 试剂：碘液；甲基红试剂；V·P试剂. ?四，操作步骤： 1．伏一普（Voges-proskauer）二氏反应，即V·P反应 （1）取葡萄糖蛋白胨水培养基四支，分别接种大肠杆菌，自己分离的大肠杆菌，枯草杆菌，留一支作空白对照，并在试管上注明菌名和组别。置37℃培养24小时。 （2）培养后取出，按书123页上的要求加试剂后，放置37℃温室30分钟，呈红色者为阳性，不呈红色者为阴性。 ?2．甲基红试验（M·R试验） （1）取葡萄糖蛋白胨水培养基四支，一支接种大肠杆菌，第二支接自己分离的大肠杆菌，第三支接枯草杆菌，第四支不接种，作空白对照。在各试管上标明菌名和组别，置37℃培养48小时。（2）培养后取出，沿管壁加入甲基红指示剂3～4滴上层呈红色者为阳性。  ?3．淀粉水解试验 （1）淀粉培养基在水浴中融化后，冷至50℃，以无菌操作制成平板。用接种环取少量枯草杆菌在平板的一边划“+”字形接种（或点种），另取少量大肠杆菌菌在平板的另一边接种，在各培养皿底部标明菌名和组别。置37℃温箱中培养16～20小时。 （2）观察结果：打开皿盖，滴加少量碘液于培养基上，轻轻旋转培养皿，使碘液均匀铺满整个平板。如果在菌周围出现无色透明圈，说明淀粉被水解。透明圈大小说明该菌水解淀粉能力的大小。  五、结果与思考题 1，将实验结果填于p123表中 “+”表示阳性反应；“-”表示阴性反应。 * * *