牛Th1_Th2型细胞因子实时荧光定量RT_PCR检测方法的建立与应用.pdf

中国兽医学报 年 月 第 卷 第 期 ２０１１ ４ ３１ ４ ＣｈｉｎＪＶｅｔＳｃｉ Ａ ｒ．２０１１ Ｖｏｌ．３１ Ｎｏ．４ ５１３ 　 　 　 　 　 　　 　 　 ｐ 　 　 　 牛 ／ 型细胞因子实时荧光定量 检测方法的建立及应用 Ｔｈ１ Ｔｈ２ ＲＴＰＣＲ － ， １ ２ １ １ １ １ １ ＊ ， ， ， ， ， （ 韩猛立 蔡曰鹏 黄 新 何延华 薄新文 钟发刚 新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点 １． 　　 　 　 ， ； ， ） 实验室 新疆石河子 石河子大学动物科技学院 新疆石河子 ８３２０００２． ８３２００３ ： ／ （ 、 、 、 、 、 、 ） 摘要 根据 ＧｅｎＢａｎｋ中牛Ｔｈ１ Ｔｈ２ ＢｏＴＮＦ ＢｏＩＦＮ ＢｏＩＬ２ＢｏＩＬ４ＢｏＩＬ６ＢｏＩＬ８ＢｏＩＬ １０型细胞因子的基 －α －γ － － － － － ， ， （ ） ， 因序列 在保守区设计并合成各自特异引物 并以牛 磷酸甘油脱氢酶 基因为内参 采用 染 ３ ＧＡＰＤＨ ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ － 　 Ⅰ 。 ／ ， 料以建立实时荧光定量 ＰＣＲ 检测方法 将 Ｔｈ１ Ｔｈ２ 型细胞因子基因克隆至 ＭＤ１８ Ｔ 载体上 转化大肠杆菌 ｐ － ， ， ＤＨ５ 经 ＰＣＲ及测序鉴定后得到阳性重组质粒 作为标准品模板建立 ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ 荧光定量 ＲＴ ＰＣＲ 标准曲 α － Ⅰ － ， 、 。 ／ 线和溶解曲线 并做灵敏性 特异性和重复性试验 对建立的 Ｔｈ１ Ｔｈ２型细胞因子 ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ 实时荧光定量 － Ⅰ