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猪流行性腹泻病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其初步应用的中期报告 【中期报告】 研究背景： 猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）是一种严重威胁猪类养殖业的病毒，其感染可导致猪只腹泻严重，甚至死亡。近年来，PEDV在全球范围内造成了大量猪只的死亡和经济损失，成为了猪类养殖业的一大难题。因此，对PEDV的快速、准确的检测方法的研究具有重要意义。 研究目的： 建立一种基于TaqMan荧光定量RT-PCR技术的PEDV检测方法，并进行初步应用。 方法： 1、制备检测标准品 选取一份PEDV阳性样品，进行RNA提取和纯化，并进行定量。根据PEDV基因组序列设计一对特异性引物和探针，制备检测标准品。 2、建立TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法 将已建立的PEDV检测标准品与未知样品RNA进行逆转录反应，利用TaqMan荧光定量RT-PCR技术进行检测。同时，利用已建立的检测标准品绘制标准曲线，计算未知样品中PEDV的检测值。 3、初步应用 利用建立的PEDV检测方法检测10批疑似PEDV感染的样品，同时利用商用试剂盒进行检测。比较两种方法的检测结果的一致性。 结果： 1、制备检测标准品 PEDV阳性样品RNA的纯化和定量均成功，制备得到了PEDV检测标准品。 2、建立TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法 利用PEDV检测标准品绘制标准曲线，检测明确、结果可靠。 3、初步应用 10批疑似PEDV感染样品中，PEDV阳性样品的检出率为80%，与商用试剂盒检测结果一致。 结论： 建立的基于TaqMan荧光定量RT-PCR技术的PEDV检测方法准确可靠，初步应用结果良好，具有广阔的应用前景。