高通量筛选定量PCR微阵列人肝细胞癌双向凝胶电泳基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱蛋白质印迹论文.doc

肝细胞癌论文：抗肝癌及逆转MDR中药成分多靶点筛选方法建立的实验研究 【中文摘要】在转录水平上建立抗肝癌及逆转MDR中药的多靶点高通量筛选方法。方法采用体外培养人肝癌细胞BEL-7402及其耐5-氟尿嘧啶细胞Bel-FU,MTT法检测Bel-FU的多药耐药性、5种中药成分的(槲皮素、EGCG、老鼠簕生物碱A、乙酰老鼠簕生物碱A、龙血素B)细胞敏感性以及药物浓度依赖的逆转耐药性;选择与肝癌发生发展相关途径的42个功能基因,采用实时定量PCR微阵列技术检测各中药成分作用于耐药细胞前后的差异表达基因,实时定量PCR检测槲皮素、EGCG、乙酰老鼠簕生物碱A分别作用于Bel-FU后H-ras、MDR1基因表达,以验证微阵列结果。结果Bel-FU对5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、长春新碱、阿霉素、柔红霉素的耐药指数分别为:89.6、3.4、37.2、16.5、3.7倍。槲皮素、EGCG、老鼠簕生物碱A、乙酰老鼠簕生物碱A、龙血素B对Bel-FU的IC50值分别为193.9μM、1230.8μM、507.8μM、244.9μM、163.7μM,对Bel-FU的IC10值分别为58.2μM、159.5μM、75.3μM、64.7μM、25.8μM。43.6、87.2、130.8μM的EGCG对... 【英文摘要】To establish a high throughput and multi-target method for screening traditional Chinese medicine as to anti-hepatocellular carcinoma and reversing MDR in the course of genetic transcription .Methods Human hepatocellular carcinoma cell line Bel-7402 and 5-FU resistant cell line Bel-FU were cultured in vitro. The multidrug resistance(MDR) of Bel-FU ,drug sensitivity of 5 kinds of traditional Chinese medicine(quercetin,EGCG,IA , ACO-IA,loureirin B)to Bel-FU and their dose-dependen reversal effec... 【关键词】肝细胞癌 多药耐药 高通量筛选 定量PCR微阵列 人肝细胞癌 双向凝胶电泳 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 蛋白质印迹 【英文关键词】hepatocellular carcinoma Multidrug Resistance high throughput screening qPCR microarray HCC MDR 2-DE MALDI-TOF-MS Western blot 【目录】抗肝癌及逆转MDR中药成分多靶点筛选方法建立的实验研究 主要英文缩写表及中英文对照表 4-6 前言 6-12 第一部分 定量 PCR 微阵列技术检测中药逆转肝癌 MDR 差异基因的实验研究 12-56 中文摘要 12-14 ABSTRACT 14-17 引言 17-19 材料与方法 19-27 结果 27-45 讨论 45-51 参考文献 51-56 第二部分 基于2-DE 与质谱技术的中药逆转肝癌MDR 蛋白质组研究 56-92 中文摘要 56-57 ABSTRACT 57-59 引言 59-60 材料与方法 60-67 结果 67-84 讨论 84-90 参考文献 90-92 全文总结 92-94 综述 94-109 参考文献 104-109 致谢 109-110 攻读硕士学位期间发表的论文 110