第五章植物离体快速繁殖和脱毒培养要点.ppt

5. 脱毒苗的保存与快速繁殖 建立脱毒种苗生产繁殖网络体系，木本植物建立隔离的脱毒苗母本园。 长期保存:延缓培养 五、植物脱毒培养的意义 能够有效地保持优良品种的特性； 生产无病毒种苗，防止品种退化； 快速繁殖新品种，使优良品种迅速应用； 节约耕地，提高农产品的商品率； 指示植物 (test plants)鉴定——利用病毒在其他植物上出现症状的特征，作为鉴别种类的标准。这种专用以产生症状的（寄主）植物就是指示植物。寄主植物能够辨别某种病毒的专化性症状。 方法：将待测植物的汁液接种到指示植物，如果待测植株带毒，则指示植物上会出现特定症状。 由于病毒的寄生范围不同，所以应根据不同的病毒选择适合的指示植物。 五、脱毒植物的鉴定方法 血清鉴定(serological test)(抗原抗体反应)：病毒抗血清具有高度的专化性，因而可用于鉴定受感染而没有症状的带毒植物。 试管沉淀反应；免 疫双扩散；酶联免疫吸附测定(ELISA)。 植物汁液 抗血清 对照血清 五、脱毒植物的鉴定方法 * Cytokinin effect on shoot development from different explant sources, R root, H hypocotyl, and C cotyledon. All explants were cultured for 4 weeks on SIM. Numbers represent zeatin (Z) or benzyladenine (B) concentrations in mg L-1 . Up to 4 mg L-1 BA in SIM showed similar shoot development with Z (A to F, G to L, and M to R). Bar 10 mm Hairy （多毛的）nightshade（茄属植物） (Solanum sarrachoides) * 通常幼龄部位产生褐化较轻，随着组织的老龄化含醌类物质增多而褐化加重。因此，在外植体接种时常需要剥去鳞片和大叶片，尤其是以切取幼嫩的芽尖或切取顶芽分生组织(或带少量叶原基)接种更为理想。 一般在春夏季，尤其是春季采取生长旺盛的外植体产生褐化较轻，已木栓化或木质化的枝条和处于休眠状态的芽作为外植体时褐化严重。即分生部位接种后形成醌类物质少，而分化的部位则形成醌类物质较多。 * 高的无机盐浓度会引起棕榈科植物外植体酚的氧化，低盐培养基，尤其是Mn2+和 Cu2+离子浓度较低时，外植体的褐化程度较轻。例如油棕用MS无机盐培养容易引起外植体的褐变，而用降低了无机盐浓度的改良MS培养基时则可减轻褐变，而且获得愈伤组织和胚状体。 植物生长调节物质使用不当时，材料也容易褐变，细胞分裂素BA有刺激多酚氧化酶活性提高的作用，这一现象在甘蔗的组织培养中十分明显。 培养基的PH值较低时常有利于减轻外植体的褐化。 一般在液体培养基和半固体培养基上褐化程度比在固体培养基上轻。 * * 在静止的液体培养基中加入抗氧化剂比在固体培养基中加入抗氧化剂，效果要明显得多。在倒挂金钟茎尖培养中加入0.01％PVP便对褐变有抑制作用。 * 继代培养是继初代培养之后的连续数代的扩繁培养过程。 * * 试管苗由于是在无菌、有营养供给、适宜光照和温度近100％的相对湿度环境条件下生长的，因此，在生理、形态等方面都与自然条件生长的正常小苗有着很大的差异。所以必须通过炼苗，例如通过控水、减肥、增光、降温等措施，使它们逐渐地适应外界环境，从而使生理、形态、组织上发生相应的变化，使之更适合于自然环境，只有这样才能保证试管苗顺利移栽成功。从叶片上看，试管苗的角质层不发达，叶片通常没有表皮毛，或仅有较少表皮毛，甚至叶片上出现了大量的水孔，而且，气孔的数量、大小也往往超过普通苗。由此可知，试管苗更适合于高湿的环境生长，当将它们移栽到试管外环境时，试管苗失水率会很高，非常容易死亡。因此，为了改善试管苗的上述不良生理、形态特点，则必须经过与外界相适应的驯化处理，通常采取的措施有：对外界要增加湿度、减弱光照；对试管内要通透气体、增施二氧化碳肥料、逐步降低空气湿度等。 另外，对栽培驯化基质要进行灭菌是因为试管苗在无菌的环境中生长，对外界细菌、真菌的抵御能力极差。为了提高其成活率，在培养基质中可掺人75％的百菌清可湿性粉剂200-500倍液，以进行灭菌处理。 Zhang SJ et al., Scientia Horticulturae xxx (2011) xxx–xxx: Direct and callus-mediated regeneration of Curcuma soloen