2017_2018学年高中生物第五章植物的组织培养技术5.1植物快速繁殖技术1素材中图版选修.doc
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植物快速繁殖技术
植物快速繁殖就是应用组织培养技术,快速繁殖名优特新品种,使其在较短时间内繁衍较多的植株;快速繁衍珍稀濒危植物,使物种得以保存。快速繁殖是当前植物细胞工程中应用最广泛,又最有效的方法之一。
除了一部分豆类作物外,种子是不会传递病毒的。植物病毒是通过无性繁殖传递的,而快速繁殖是建立在无性繁殖的基础上,病毒在母体内逐代积累,危害越来越严重。目前在生产上尚无特效药物可彻底除去病毒,而快速繁殖却可以,因此,快速繁殖脱毒显得非常重要。
一、植物快速繁殖的途径和方法
??? 以植物的根、茎、叶柄和花等片段以及孢子作为外植体,或者切取茎尖、腋芽进行离体培养,可以直接诱导器官分化,产生芽、根,也可以诱导改变原有的分化状态,脱分化形成愈伤组织,再经过不同的细胞分化途径重建形成不同的器官,直到完整植株。(P86 L.1~L.16)
????????????????????? 植物快速繁殖的类型与方式可归纳如下表:
类型 方 式 特 点 事 例 器官型 腋芽萌发,以芽增殖芽,扩大繁殖系数 繁殖系数高,一转性较稳定,是快速繁殖的主要方式 甘蔗、香蕉、香石竹、丝石竹等 器官发生型 通过脱分化形成愈伤组织,再分化出苗 可获得与母株相同的小植株,繁殖系数较低,可用于细胞分化的研究 烟草、油菜等 胚状体发生型 从愈伤组织或直接从子叶、下胚轴和花药培养中产生 首先证明植物细胞的全能性,繁殖系数高 甘蔗、胡萝卜、石刁柏等 原球茎型 由茎尖或腋芽产生原球茎放入培养基中发育成小植株 遗传性较稳定,原球茎可作为繁殖系母体 兰花 球茎芽型 叶柄表面产生圆球形小突起——球茎芽,一端出芽一端出根 遗传性较稳定,球茎芽可直接放入土中种植 观叶海棠 块茎型 叶片或叶柄上形成粒状芋块,进一步分化出芽和根 块茎芽可为繁殖系母体,不断切割繁殖移栽,成活率高 花叶芋 鳞茎型 鳞片近轴面或边缘直接形成带根的小鳞茎 在试管内形成小鳞茎需较长时间 百合、郁金香、贝母等 孢子型 用成熟或未成熟的孢子进行培养 孢子繁殖最困难的是表面消毒,萌发时间较长 地钱、狼尾蕨等 根茎型 蕨类具有横向的茎及直立的短根茎,为组织培养的最佳外植体 根状茎上产生蕨叶及根,繁殖速度较孢子型快 肾蕨、裂叶肾蕨、波士顿蕨等 微枝扦插型 带芽的小插条在试管内进行无菌扦插 为木本植物进行快速繁殖的主要方式 葡萄、杨树 快速繁殖中茎尖培养脱毒
??? 无病毒苗的获得:
(一)材料的培养和灭菌
??? 为了获得无菌的茎尖,应把供试植株种在无菌的盆土中,放在温室栽培。浇水要浇在土中,不要浇在叶片上。如材料取自田间,可切取插条,在实验室内进行溶液培养。由这些插条的腋芽长成的枝条,其污染程度比直接从田间植株取来的枝条少得多。自外,定期喷施内吸杀菌剂(如0.1%多菌灵和0.1%链霉素)也十分有效。
(二)茎类剥离
??? 取幼苗茎尖2~3cm小段,剥去可见的大叶,放在烧杯内用自来水冲洗1h左右,移入无菌室进行严格消毒。先用95%酒精快速浸泡一下,再放入5%的漂白粉溶液内消毒7~10min(也可用市场上出售的次氯酸钠溶液稀释为5%),然后用无菌水冲洗3~4次,在双筒解剖镜下一手用细镊子将茎芽按住,另一手用解剖针仔细地将幼叶剥去,最后露出圆滑的生长点,用注的针头侧刃或自制的解剖针,仔细地切取带有1~2个叶原基的生长点,随即接种到试管培养基上进行培养。这样外植体(生长锥带1~2个原叶基)的培养,严格来说,应称为分生组织培养。
??? 以上操作必须严格在无菌条件下的超净工作台中进行,所用器具都应浸泡于70%的酒精中,使用前要在究竟灯上烧灼灭菌,注意不使解剖针、刀太烫,以免损伤组织。解剖镜台应垫载玻片,每剥离一个茎尖应以酒精棉团擦拭,手也应经常用70%酒精擦试。茎尖很幼嫩,暴露时间越短约好。因为超净台的气流和酒精灯发出的热都会使茎尖迅速变干。
(三)茎尖培养
??? 目前常使用的的基本培养基是MS培养基或White培养基,它有较高浓度的无机盐,对促进组织分化和愈伤组织生长是有利的。在培养基中可酌情添加5%~10%椰乳,0.1~1.0mg/L的吲哚乙酸、萘乙酸、苄基腺嘌呤等,有的还需添加活性炭。根据培养种类不同,添加的生长调节剂可适当调整。(P92~P93 L.11)
??? 茎尖培养的生长可能有4种类型: ① 组织不增大,不久变褐死亡,这可能是生长点受伤所致。 ② 组织渐变绿,但体积增大缓慢,可把组织转到NAA浓度高于0.05mg/L的培养基上,并提高温度以加速其生长。 ③ 组织基部不产生或少量产生愈伤组织,而生长点发育正常,一个月内可形成无根的小植株,这是最理想的情况。当长有2~3片西欧啊叶时,应把小植株转到无生长素的培养基上,促进生根。 ④ 茎尖基部产生大量愈伤组织而生长点很少伸
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