【2017年整理】支气管肺泡灌洗(BAL) 操作方法：.doc

支气管肺泡灌洗(BAL) 操作方法： 一、术前准备同纤维支气管镜(纤支镜) 术前准备,常规在纤支镜气道检查后于活检刷检前做BAL。局部麻醉剂为2 %利多卡因。二、BAL 操作技术1.灌洗部位选择:对弥漫性间质性肺疾病选择右肺中叶(B1或B5 ) 或左肺舌段，局限性肺病变则在相应支气管肺段进行BAL2. BAL 操作步骤◎首先在要灌洗的肺段经活检孔通过一细硅管注入2 %利多卡因1～2ml ,做灌洗肺段局部麻醉◎然后将纤支镜顶端紧密楔入段或亚段支气管开口处,再经活检孔通过硅胶管快速注入37 ℃灭菌生理盐水,每次25～50ml ,总量100～250ml ,一般不超过300ml◎立即用50 ～100mmHg(1mmHg = 0. 133kPa) 负压吸引回收灌洗液, 通常回收率为40 %～60 %◎将回收液体立即用双层无菌纱布过滤除去粘液,并记录总量◎装入硅塑瓶或涂硅灭菌玻璃容器中(减少细胞粘附) ,置于含有冰块的保温瓶中,立即送往实验室检查支气管肺泡灌洗液(BALF) 实验室检查一、BALF 细胞总数和分类计数检测1.将上述回收灌洗液装入塑料离心管内, 在4 ℃下以1 200r/ min 离心10min ,上清(原液或10 倍浓缩) - 70 ℃储存,用做可溶性成分的检测。2. 经离心沉淀的细胞成分用Hank’s液(不含Ca2+ 、Mg2+ ) 在同样条件离心冲洗2 次, 每次5min。弃去上清后Hank’s 液3～5 ml 制成细胞悬液。也可以应用灌洗原液以减少细胞丢失3. 在改良的Neubauer 计数台上计数BALF 中细胞总数,一般以1 ×109/ L表示。如果细胞数过高时,再用Hank’s液稀释,调整细胞数为5 ×109/ L ,并同时将试管浸入碎冰块中备用4. 细胞分类计数:采用细胞离心涂片装置,加入备用细胞悬液(细胞浓度为5 ×109/ L) 100μl ,在4 ℃下以1 200 r/min 离心10 min通过离心作用将一定数量的BALF 细胞直接平于载玻片上。取下载玻片立即用冷风吹干,置于无水乙醇中固定30 min 后进行染色,一般用Wright 或HE 染色RPMI 1640 培养液3～5ml 制成细胞悬液2. 将细胞悬液倒人平皿中,置于37 ℃5 %CO2 培养箱中孵育2h ,进行贴壁处理,去除肺泡巨噬细胞3. 取出细胞悬液,再用Hank’s 液冲洗离心1 次,弃上清留20～100μl 。经贴壁处理后的细胞悬液中,肺泡巨噬细胞显著减少,淋巴细胞相对增多4. 将经贴壁处理的细胞悬液分装3个小锥 形离心管内,每管20～30μl ,用微量加样器向标本中加单 HYPERLINK /Search.asp?ModuleName=ArticleField=TitleKeyword=克隆 克隆抗体CD3 ,CD4 和CD8 各20～40μl ,混匀置于4 ℃冰箱中作用1～2h5. 取出标本,先用Hank’s 液冲洗离心2 次,以12 000 r/ min 离心20s ,然后加羊抗鼠荧光抗体各20～40μl ,置于4 ℃冰箱作用30min。6. 取出标本用Hank’s 液以同样速度和时间离心冲洗2 次,弃上清留20μl充分混匀细胞,取1 滴于载玻片上加盖玻片。荧光显微镜下数200 个淋巴细胞并计算出标有荧光细胞的阳性率几点说明 第二节　 HYPERLINK /zhiqiguan_102025/ \o 医学百科：支气管 支气管 HYPERLINK /feipao_40651/ \o 医学百科：肺泡 肺泡灌洗液检查 　　痰液检查虽可对呼吸道疾病的诊断提供帮助，但不够灵敏与特异且对疾病定位帮助不 HYPERLINK /zhiqiguanfeipaoguanxishu_102140/ \o 医学百科：支气管肺泡灌洗术 支气管肺泡灌洗术（bronchoalceolar lavage, HYPERLINK /BAL_105422/ \o 医学百科：BAL BAL）中在 HYPERLINK /xianwei_106651/ \o 医学百科：纤维 纤维支 HYPERLINK /qiguan_47248/ \o 医学百科：气管 气管镜基础上发展起来的项新技术。BAL是应用纤维支气管镜进行支气管肺泡灌洗，采取肺泡表面衬液进行 HYPERLINK /yanzheng_48852/ \o 医学百科：炎症 炎症与 HYPERLINK /mianyi_106949/ \o 医学百科：免疫 免疫 HYPERLINK /xibao_40744/ \o 医学百科：细胞 细胞及可溶性物质检查的方法。与支气管冲洗少量液体注入支气管信 HYPERLINK /guanzhu_158/ \o 医学百科：灌注 灌注