动物细胞工程2.ppt

教学目标 了解动物细胞融合的原理、过程和意义。 理解单克隆抗体制备的过程和 应用 材料: 1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人—鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？ 【例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 （ ） A.离心 B.灭活的病毒 C.电刺激 D.振动 【例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（ ） A.具有原来两个或多个细胞的遗传信息 B.能无限增殖 C.可形成新个体 D.培养过程会贴壁 【例3】动物细胞融合的作用中最重要的是（ ） A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞 3、单克隆抗体的应用 3. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用 特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 （ ） ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞　 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A.②④ B.①③⑤　　 C.①②③④ 　 D.②③ * * 2.2 动物细胞工程 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 人-鼠(想像图) 一、动物细胞融合 1.概念： 动物细胞融合（cell fusion）也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。 2、原理： 细胞膜的流动性 诱导方法： 物理方法： 化学法： 生物法： 灭活的病毒 电激等 聚乙二醇（PEG) 3.融合过程： 为什么灭活的 病毒能作诱导剂？ 3.融合过程： 灭活丧失感染性 保留融合活性 4.动物细胞融合技术的意义和应用 小结：植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 主要用途 诱导方法 使用的酶 融合前处理 原理 细胞膜的流动性细胞的全能性 细胞膜的流动性 纤维素酶、果胶酶 胰蛋白酶 物理方法 （离心、振荡、电激） 化学方法（PEG） 物理、化学方法 灭活的病毒 获得杂种植株 获得杂交细胞、 制备单克隆抗体 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 B B A 强调：效应B淋巴细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞 抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。 能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B细胞）。 二、单克隆抗体 B淋巴细胞 效应B淋巴细胞 记忆B淋巴细胞 分化 抗体的传统生产方法 从血清中分离抗体 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 多种效应B细胞 动物体内 多种抗体 抗原 读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。 1.单克隆抗体的概念 单克隆抗体：单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体 提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？ 提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？ 问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。 2.单克隆抗体的制备 提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体 的能力和肿瘤细胞无限增殖能 力同时具备呢？ 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖 杂交瘤细胞 动物细胞培养技术 设计方案： 动物细胞融合技术 单克隆抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞 1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验 ①为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？ ② 会有哪几种融合方式？ ③ 杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？ ④ 是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？ ⑤ 如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？ BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤） （一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活 获得产生相应抗体的B细胞 （二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞 √ 体外培养 小鼠腹腔内培养 杂交瘤细胞特点：既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体。 单克隆抗体的优点 特异性强、灵敏度高，并能大量制备。 （1）作为诊断试剂——最广泛应用 准确、高效