改良大鼠心脏微血管内皮细胞的培养方法及鉴定.pdf

浙江预防医学　２０１４年１月第２６卷第１期　ＺｈｅｊｉａｎｇＰｒｅｖＭｅｄ，Ｊａｎ．２０１４，Ｖｏｌ２６，Ｎｏ．１ ·１９· ·论　著 · 改良大鼠心脏微血管内皮细胞的培养方法及鉴定 １ ２ １，２ 周蓉芳 ，李莉 ，严静 １温州医科大学第一临床医学院，浙江 温州　３２５０００；２浙江医院重症医学科 摘要：目的　建立一种分离大鼠心脏微血管内皮细胞的方法。方法　雄性ＳＤ大鼠２只，快速取出心脏，去除左室外约１／４层， 充分剪碎剩余组织， 型胶原酶和胰酶先后消化２０～３０ｍｉｎ，过滤并离心收集细胞，加入培养液置于细胞培养箱中培养。结果 Ⅱ 原代细胞基本于接种后１～２ｈ已大部分贴壁，２４ｈ细胞充分伸展，并进入对数生长期，细胞增殖迅速，培养３ｄ时，可见细胞 汇合度达８０％～９０％，细胞长至融合后呈典型的 “铺路石”或 “鹅卵石”征。免疫细胞化学鉴定表明在分离培养的大鼠心脏 微血管内皮细胞中有特定 因子及ＣＤ３１表达，体外小管形成实验证明大鼠心脏微血管内皮细胞具有小管形成的能力。原代周 Ⅷ 期３～４ｄ，传代周期２～３ｄ，Ｐ２代细胞纯度达９５％以上。传至Ｐ４代仍未见细胞形态及分裂增殖活性下降。结论　本方法培养 大鼠心脏微血管内皮细胞简单有效，重复性好，且获得细胞数量多、纯度高，有利于实验人员掌握。 关键词：大鼠；心脏微血管内皮细胞；原代培养；鉴定 中图分类号：Ｒ－３３１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００７－０９３１（２０１４）０１－００１９－０５ Ａｎｉｍｐｒｏｖｅｄｃｕｌｔｕｒｅｍｅｔｈｏｄｏｆｉｓｏｌａｔｉｎｇａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｉｎｇ ｃａｒｄｉａｃｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｉｎｒａｔｓ ＺＨＯＵＲｏｎｇ－ｆａｎｇ，ＬＩＬｉ，ＹＡＮＪｉｎｇ ＷｅｎｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｅｎｚｈｏｕ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ３２５０００，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｋｉｎｄｏｆｓｉｍｐｌｅａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｓｙｓｔｅｍｗｈｉｃｈｃｕｌｔｕｒｅｓｐｒｉｍａｒｙｒａｔｃａｒｄｉａｃｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＴｈｅｈｅａｒｔｓｗｅｒｅｒａｐｉｄｌｙｏｂｔａｉｎｅｄｕｎｄｅｒｓｔｅｒｉｌｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｒｏｍｔｗｏＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙｒａｔｓ（ｏｎｅ ｍｏｎｔｈ＇ｓｏｌｄ，ａｂｏｕｔ１００ｇｗｅｉｇｈｔ）ａｎｄｔｈｅｏｕｔｅｒｏｎｅ－ｆｏｕｒｔｈｏｆｔｈｅｌｅｆｔｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｔｉｓｓｕｅｗａｓｒｅｍｏｖｅｄ．Ｔｈｅｒｅｍａｉｎｉｎｇｈｅａｒｔ ｔｉｓｓｕｅｗａｓｍｉｎｃｅｄｆｉｎｅｌｙ，ｉｎｃｕｂａｔｅｄｗｉｔｈｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅａｎｄｔｒｙｐｓｉｎ．Ｃｅｌｌｓｓｈｏｕｌｄｂｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｂｙｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎａｆｔｅｒｆｉｌｔｅｒｅｄ． Ｔｈｅｎ，ｔｈｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｕｓｐｅｎｄｅｄａｎｄｐｌａｔｅｄｏｎａＴ２５ｆｌａｓｋｆｏｒ２ｈｏｕｒｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｍｏｓｔｃｅｌｌｓｗｅｒｅａｄｈｅｒｅｄｔｏｔｈｅｂｏｔｔｏｍｏｆ ｔｈｅｆｌａｓｋａｆｔｅｒ１－２ｈｏｆｐｌａｔｉｎｇ，ａｎｄｂｅｇａｎｔｏｓｐｌｉｔａｔ２４ｈ．Ａｆｔｅｒ３ｄａｙｓｏｆｐｌａｔｉｎｇ，ｔｈｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅ８０％～９０％ ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ ａｎｄｓｈｏｗｅｄａｔｙｐｉｃａｌｐａｖｉｎｇｓｔｏｎｅｏｒｃｏｂｂｌｅｓｔｏｎｅａｐｐｅａｒａｎｃｅ．Ｔｈｅｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅａｄｈｅｒｅｎｔ ｃｅ