一种高纯度小鼠原代脑微血管内皮细胞的分离培养方法.doc

一种高纯度小鼠原代脑微血管内皮细胞的分离培养方法 张作慧1，陈 晨2，陈 浩1，崔桂云1，花 放1( 1徐州医科大学附属医院神经内科，徐州医科大学神经病学教研室，江苏省徐州市 221002；2徐州医科大学附属医院神经外科，徐州医科大学神经外科学教研室，江苏省徐州市 221002) 引用本文：张作慧，陈晨，陈浩，崔桂云，花放. 一种高纯度小鼠原代脑微血管内皮细胞的分离培养方法[J].中国组织工程研究，2016，20(51):7666-7671. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.51.010 ORCID: 0000-0002-8486-4767(张作慧) 文章快速阅读： 文题释义： 人脑微血管内皮细胞：是血脑屏障的主要组成成分，能够限制可溶性物质和细胞等从血液进入大脑。大脑微血管内皮细胞与外周内皮细胞相比具有一些相同特性。 紧密连接：由分支状封闭索网络组成，每条封闭索独立于其他封闭索作用。因而，紧密连接防止离子通过的能力随封闭索的数目指数式增长。每条封闭索由一列嵌入两个原生质膜的跨膜蛋白构成，蛋白的胞外结构域使其彼此间一个个直接相联。尽管还有其他蛋白存在，两种主要类型的蛋白是密封蛋白和闭合蛋白，它们与位于细胞膜内侧的不同的把封闭索锚定到肌动蛋白细胞骨架的外周膜蛋白相联。因此，紧密连接连起了相邻细胞的细胞骨架。 摘要 背景：脑微血管内皮细胞是神经科学研究领域的重要工具细胞，如何获得高纯度的脑微血管内皮细胞一直是体外研究的关键和难点。 目的：探索一种简便易操作，高纯度的原代脑微血管内皮细胞的分离培养方法。 方法：使用6-8周龄C57BL/6小鼠，经酶消化及梯度离心法获得微血管段，使用药物进一步纯化内皮细胞，利用CD31和GFAP免疫荧光染色鉴定内皮细胞纯度。使用Claudin-5免疫荧光染色鉴定紧密连接蛋白的表达情况。 结果与结论：①细胞呈旋涡状或铺路石样排列、生长；②免疫荧光显示内皮细胞纯度达99%以上，并广泛表达紧密连接蛋白；③结果表明，实验建立了一种简便、易操作的，可以获得大量高纯度的原代小鼠脑微血管内皮细胞的培养方法。 关键词： 组织构建；血管内皮细胞；脑微血管内皮细胞；小鼠；原代培养；形态学；细胞免疫荧光；CD31；Claudin-5；国家自然科学基金 主题词： 内皮细胞；细胞培养；荧光免疫测定；组织工程 基金资助： 国家自然科学基金青年基金；江苏省六大人才高峰资助项目(2014-WSN-034) Isolation and culture of primary microvascular endothelial cells from mouse brains Zhang Zuo-hui1, Chen Chen2, Chen Hao1, Cui Gui-yun1, Hua Fang1 (1Department of Neurology, the Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University, Department of Neurology of Xuzhou Medical University, Xuzhou 221002, Jiangsu Province, China; 2Department of Neurosurgery, the Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University, Department of Neurosurgery of Xuzhou Medical University, Xuzhou 221002, Jiangsu Province, China) Abstract BACKGROUND: Brain microvascular endothelial cells (BMECs) are important tools in the field of neuroscience research; therefore, how to obtain highly purified BMECs is a key and difficulty in vitro. OBJECTIVE: To develop a simple method of isolating and culturing highly purified BMECs. METHODS: C57BL/6 mice aged 6-8 weeks old were selected, and microvessels were obtained using enzyme digestio